[发明专利]Q型烟粉虱特异性SS-COI引物及快速PCR检测方法和试剂盒

说明书

一种Q型烟粉虱特异性SS‑COI引物，涉及分子生物学技术领域，包括Q型烟粉虱特异性SS‑COI引物及快速PCR检测方法和试剂盒。所述引物序列为：引物BQLF：5′‑GTTTTGTGATGTTTGTTGGAGT‑3′；和引物BQLR：5′‑ACCCCATCAAACTACCAAAG‑3′。本发明的特异性引物不仅对Q型烟粉虱的单头成虫可以进行检测，对单粒卵、初孵若虫、2龄若虫、3龄若虫和拟蛹也可准确检测。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及Q型烟粉虱特异性SS-COI引物及快速PCR检测方法和试剂盒。

背景技术

烟粉虱Bemisia tabaci (Gennadius)属昆虫纲( Insecta )，半翅目( Hemiptera )，粉虱科(Aleyrodidae)，伯粉虱属（Bemisia Quaintance Baker，1914）。烟粉虱属于体型微小的植食性刺吸类害虫，分布于亚洲、欧洲、非洲、南美洲和大洋洲的很多国家和地区。烟粉虱寄主植物的种类和危害程度不断增加，除了本身从叶内吸取汁液、分泌蜜露影响光合作用，还传播多种植物病毒，引起寄主植物70多种病毒病大发生。

烟粉虱被认为是个快速进化的复合种，至少包含30个形态上难以区分的隐种（包括A、B、K、D、E、G、H、L、M、N、Ms、JPL和Q型等多种生物型），部分是区域性比较强的生物型，其中B型和Q型是两种入侵性较强的生物型。Q型烟粉虱和B型烟粉虱常混合发生，二者在形态上无法区分，在生物学特性、寄主植物、生理和分子水平上存在明显差异。Q型烟粉虱起源于地中海地区，目前已在包括中国在内的很多国家发生危害。罗晨、吴杏霞等人利用分子生物学方法研究发现早期在我国造成严重危害的烟粉虱主要为B型烟粉虱。但2003年首次在云南昆明发现Q型烟粉虱，目前我国每个地区乃至世界各地都有Q型烟粉虱发现，由于Q型烟粉虱比B型烟粉虱有强的抗药性及传毒能力，在部分地区已成为优势种群，并逐步取代B型烟粉虱成为主要危害种群。

Q型烟粉虱在形态上难以鉴定，给检疫、监测和防治带来一定困难。目前国际上对烟粉虱的生物型鉴定主要依据生物学、酶位点多态性及分子鉴定（RAPD标记、AFLP标记、ITS1标记、mt DNA COI标记及SSR分子标记）。国内还没有标准的鉴定方法。SS-COI技术通过特异性引物对基因组DNA进行一次扩增，根据特异性扩增片段的有无来达到鉴别物种的目的，该技术不仅简单易行、成本低而且与已有的通过特异性SCAR引物快速PCR检测方法相比灵敏度更高，检测结果更稳定。特异性引物一旦获得，为Q型烟粉虱的快速识别、检疫、监测及针对性防治提供有力依据。

发明内容

有鉴于此，有必要提供一种Q型烟粉虱特异性SS-COI引物及用于Q型烟粉虱的检测方法及试剂盒。本发明的技术方案如下：

Q型烟粉虱特异性SS-COI引物，用于检测Q型烟粉虱包括对待测粉虱的PCR扩增和检测PCR扩增产物，所述PCR扩增所采用的引物为：

引物BQLF：5′-GTTTTGTGATGTTTGTTGGAGT-3′和

引物BQLR：5′-ACCCCATCAAACTACCAAAG-3′。

检测PCR扩增产物指对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察其产物是否出现特征条带，Q型烟粉虱出现了一条335 bp的特征性条带。

本发明还提供了一种Q型烟粉虱特异性检测方法，根据本发明的Q型烟粉虱种特异性检测方法包括使用上述SS-COI引物进行PCR扩增的步骤。

本发明还提供了一种Q型烟粉虱特异性检测试剂盒，根据本发明的Q型烟粉虱种特异性检测试剂盒包括上述Q型烟粉虱特异性SS-COI引物。

优选的，根据本发明的Q型烟粉虱特异性检测试剂盒包括核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示的特异性检测片段。