[发明专利]一种甲醛浓度的定量检测方法

说明书

本申请公开一种甲醛浓度的定量检测方法，取待测溶液，加入甲醛荧光探针，反应结束后分别在激发波长为440nm、发射波长为540nm和激发波长为535nm、发射波长为585nm条件下检测反应液的荧光强度值，然后两个检测条件下的荧光强度值相乘，再将相乘值带入线性标准曲线中，计算得到待测溶液中的甲醛浓度；其中甲醛荧光探针的结构式如式I所示：应用于相乘型检测模式检测待测溶液的甲醛浓度时，在特定浓度配比下，两个不同通道的荧光强度值相乘值与甲醛浓度之间呈现线性关系，提高检测灵敏度的同时降低检测下限。

技术领域

本申请涉及荧光探针领域，具体地，涉及一种相乘型检测模式的甲醛浓度定量检测方法。

背景技术

甲醛是分子结构最简单的醛，也是众所周知作为致癌和诱变污染物。环境中的甲醛主要由人为工业生产和生物燃料燃烧，同时，甲醛也是动植物中内源性活性羰基物质。正常浓度的甲醛在空间记忆和认知能力的形成中起着重要作用，而过量的甲醛会导致学习和记忆障碍、过敏性肺部炎症、哮喘症状和癌症的产生。因此，准确检测人体的甲醛浓度是非常重要且值得的。

近年来，荧光探针技术由于其准确性高、操作简单等优点被广泛应用于细胞甲醛的检测。目前，主要的检测模式有增强型、减弱型以及比率型检测模式。

发明内容

本发明提供一种甲醛荧光探针，应用于相乘型检测模式检测待测溶液的甲醛浓度，在特定浓度配比下，两个不同通道的荧光强度值相乘值与甲醛浓度之间呈现线性关系，提高检测灵敏度的同时降低检测下限，还可用于细胞内甲醛成像分析。

一种甲醛荧光探针，结构式如式I所示：

本发明还提供一种如所述甲醛荧光探针在定量检测甲醛浓度中的应用。

本发明还提供一种甲醛浓度的定量检测方法，包括：

取待测溶液，加入所述的甲醛荧光探针，反应结束后分别在激发波长为440nm、发射波长为540nm和激发波长为535nm、发射波长为585nm条件下检测反应液的荧光强度值，然后两个检测条件下的荧光强度值相乘，再将相乘值带入线性标准曲线中，计算得到待测溶液中的甲醛浓度；荧光探针在待测溶液中的加入量以荧光探针的摩尔浓度与溶液中甲醛浓度计为：0.005mM荧光探针：0-5mmol/L甲醛浓度。

本发明研究发现，本发明制备得到的甲醛荧光探针在特定浓度比下与特定检测模式下与甲醛浓度之间呈线性关系。

相乘型检测模式的甲醛荧光探针的荧光检测原理为：在水溶液中探针本身几乎没有荧光，与甲醛反应后，探针的萘酰亚胺及罗丹明通道的荧光强度均增加，将两个荧光强度值进行相乘作为甲醛浓度的检测信号。

依据相乘型检测模式，探针只对甲醛具有响应能力，对其他活性碳簇、活性氧簇、生物硫醇没有响应。因此，探针可对溶液和细胞中的甲醛浓度进行检测，为研究细胞中甲醛的生理作用提供了新的检测手段。

以下还提供了若干可选方式，但并不作为对上述总体方案的额外限定，仅仅是进一步的增补或优选，在没有技术或逻辑矛盾的前提下，各可选方式可单独针对上述总体方案进行组合，还可以是多个可选方式之间进行组合。

可选的，甲醛荧光探针与待测溶液的反应条件为：温度36℃～38℃；反应时间2～3小时；反应体系pH值为7.0～7.5。

可选的，甲醛荧光探针与待测溶液的反应条件为：温度37℃；反应3小时；反应体系pH值为7.4左右(例如7.3～7.5之间)。

可选的，所述线性标准曲线中，纵坐标为激发波长440nm、发射波长为540nm和激发波长为535nm、发射波长为585nm条件下检测反应液的荧光强度值的乘积，横坐标为甲醛浓度。