[发明专利]高压液体浸入式数字PCR方法、数字PCR芯片及其制备方法

权利要求书

1.一种高压液体浸入式数字PCR方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.将经过进样处理的数字PCR芯片浸入高压反应室的液体中；所述进样处理的所述数字PCR芯片中各PCR微反应单元(75)处于隔离状态；

S2.排空所述高压反应室内的空气，对排空空气后的所述高压反应室增压；所述增压用于在高温的情况下抑制所述数字PCR芯片内气泡的产生；

S3.将增压后的所述高压反应室放到PCR仪上进行所述PCR反应；

S4.对PCR反应后的所述高压反应室进行冷却；

S5.将冷却后的所述高压反应室降压；

S6.将所述高压反应室中的数字PCR芯片取出，对所述数字PCR芯片进行荧光信号分析。

2.根据权利要求1所述的高压液体浸入式数字PCR方法，其特征在于，步骤S1中所述进样处理包括以下步骤：

S11.将进样器与数字PCR芯片组合好，使得所述数字PCR芯片的反应层的进样口(71)、出样口(72)分别与所述进样器的进样池(8)、出样口(9)对准并紧密贴合；

S12.将PCR反应液加入到所述进样器的进样池(8)中，使用注射器在所述进样器的出样口(9)处向外抽气，使所述PCR反应液经过所述数字PCR芯片的反应层的进样口(71)流入所述数字PCR芯片的反应层的主流道(73)，直至部分所述PCR反应液经过所述数字PCR芯片的反应层的出样口(72)从所述进样器的出样口(9)流出；

S13.使用注射器自所述进样器的负压腔(10)的抽气口(11)处向外抽气，直至所述PCR反应液充满与所述主流道(73)相连通的各分支流道(74)以及与所述各分支流道(74)相连通的各PCR微反应单元(75)；

S14.吸掉所述进样器的进样池(8)处的多余PCR反应液，并滴加隔离油；

S15.使用注射器在所述进样器的出样口(9)处抽气，使所述隔离油填满所述反应层的主流道(73)，完成对各PCR微反应单元(75)的隔离。

3.根据权利要求1所述的高压液体浸入式数字PCR方法，其特征在于，步骤S2中通过注中性溶液对高压反应室进行排空气。

4.根据权利要求1所述的高压液体浸入式数字PCR方法，其特征在于，所述高压反应室的压强为210-500KPa。

5.一种数字PCR芯片，其特征在于，所述数字PCR芯片用于执行如权利要求1-4中任一项所述的高压液体浸入式数字PCR方法。

6.根据权利要求5所述的数字PCR芯片，其特征在于，包括依次设置的基底层(5)、空白层(6)和反应层(7)，

其中，所述反应层(7)具有主流道(73)、与所述主流道(73)相连通的各分支流道(74)以及与所述各分支流道(74)相连通的各PCR微反应单元(75)；所述反应层(7)还具有进样口(71)和出样口(72)，所述反应层的进样口(71)与进样器的进样池(8)相连通，所述反应层的出样口(72)与进样器的出样口(9)相连通。

7.根据权利要求6所述的数字PCR芯片，其特征在于，所述基底层(5)采用支撑材料制成，用于对所述空白层(6)和所述反应层(7)进行支撑。

8.根据权利要求6所述的数字PCR芯片，其特征在于，所述空白层(6)和所述反应层(7)采用聚二甲基硅氧烷制成。

9.一种制备如权利要求5-8中任一项所述的数字PCR芯片的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)清洗硅片，在所述硅片上制作反应层模具；

2)将聚二甲基硅氧烷以及固化剂混合均匀并脱气后浇注到所述反应层模具上，热固化形成具有主流道(73)、各分支流道(74)以及各PCR微反应单元的聚二甲基硅氧烷膜片；将所述聚二甲基硅氧烷膜片从所述反应层模具上取下并打孔形成进样口(71)和出样口(72)，制成具有进样口(71)、出样口(72)、主流道(73)、各分支流道(74)以及各PCR微反应单元(75)的反应层(7)；

3)将聚二甲基硅氧烷以及固化剂混合均匀旋涂在硅片上，固化形成空白层(6)；

4)将步骤2)获得的反应层(7)与步骤3)获得的空白层(6)一起经等离子体激活处理后键合在一起；

5)将步骤4)获得的两层聚二甲基硅氧烷键合结构与基底层(5)经等离子体激活处理后键合在一起，即制成数字PCR芯片。