[发明专利]水稻静息巯基氧化酶在改善面粉加工品质中的应用

权利要求书

1.重组水稻静息巯基氧化酶在增强面粉粉质特性和/或改善面包的烘焙品质中的应用，其特征在于：

单独添加重组水稻静息巯基氧化酶；

水稻静息巯基氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，或者，如SEQ ID NO：2的第31-476位氨基酸所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：

所述的重组水稻静息巯基氧化酶在面粉中的添加水平为面粉基的0.05%～1.0%w/w。

3.一种应用重组水稻静息巯基氧化酶改善面包的烘焙品质的方法，其特征在于：将重组水稻静息巯基氧化酶、面粉、糖、盐、植物油、酵母粉和水搅拌均匀，形成的面团经分割称重、成形以及醒发后，焙烤得到面包成品；

所述的重组水稻静息巯基氧化酶的添加水平为面粉基的0.05%～1.0%w/w；

水稻静息巯基氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，或者，如SEQ ID NO：2的第31-476位氨基酸所示。

4.根据权利要求3的方法，其特征在于：

所述的重组水稻静息巯基氧化酶的制备方法，采用大肠杆菌表达体系表达，并采用柱层析方法纯化重组rQSOX蛋白；按照rQSOX：FAD=1：1～5的摩尔比添加FAD到纯化的重组rQSOX蛋白溶液中，获得具有巯基氧化活性的重组水稻静息巯基氧化酶。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：

所述的大肠杆菌表达体系中采用的出发表达载体为pMAL-c5x，出发表达菌株为大肠杆菌Rosetta-gami B(DE3)。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：

所述的重组水稻静息巯基氧化酶的制备方法，包括如下步骤：

（1）利用全基因合成技术，合成了水稻静息巯基氧化酶的全基因序列，利用引物F和引物P进行PCR扩增；将纯化得到的目的基因片段连接至载体质粒pMAL-c5x上，酶切位点为NdeI和EcoRI，构建出了水稻静息巯基氧化酶重组表达质粒pMAL-c5x-rqsox；

引物F：5′-GGCCCATATGCGCTCGCTCGGCGGCAGGGA-3′，其中，下划线部分为NdeI限制性酶切位点；

引物P：5′-GGCCGAATTCGCTTGCAGCATTAGAAATCGATG-3′；其中，下划线部分为EcoRI限制性酶切位点；

（2）将重组表达质粒pMAL-c5x-rqsox转入到大肠杆菌Rosetta-gami B(DE3)感受态细胞中，得到重组表达菌；将重组表达菌接种到LB液体培养基培养至OD₆₀₀达到0.6～0.8，在16～37℃条件下添加0.2～1.0mM IPTG诱导重组蛋白表达8～12小时后收集菌体；

（3）收集的菌体经冰浴超声破碎后，离心收集上清液，利用Ni-NTA纯化重组水稻静息巯基氧化酶蛋白；

（4）按照rQSOX：FAD=1：1～5的摩尔比添加FAD到纯化的重组水稻静息巯基氧化酶蛋白溶液中，低温孵育过夜，经透析脱盐处理去除多余的FAD，获得具有巯基氧化活性的重组水稻静息巯基氧化酶。