[发明专利]一种预示和鉴定公鸡心脏生长发育的分子标记方法

权利要求书

1.一种预示和鉴定公鸡心脏生长发育的分子标记方法，其特征在于，步骤如下：

1）根据SEQ ID NO.3所示的序列设计引物TCF21-F和TCF21-R，获得扩增引物；

2）提取鸡的基因组DNA；

3）利用步骤1）所得的扩增引物以步骤2）提取的DNA为模板，进行鸡基因组DNA的PCR扩增，获得扩增产物；

4）利用限制性内切酶RsaI对步骤3）所得的扩增产物进行酶切，获得酶切产物；

5）利用琼脂糖凝胶对步骤4）所得的酶切产物进行电泳分离，根据电泳分离结果进行基因型判定，比较各基因型对应的公鸡心脏性状，确定公鸡心脏生长发育的标记基因型，即完成预示和鉴定公鸡心脏生长发育；

步骤1）中所述引物TCF21-F序列如SEQ ID No：1所示；所述引物TCF21-R如SEQ ID No：2所示；

步骤5）中所述基因型判定标准：①电泳呈现一条带，大小为332bp，则SEQ ID NO.3所示的序列的106位是C碱基，将其命名为CC基因型；②电泳呈现两条带，大小为106bp和226bp，则SEQ ID NO.3所示的序列的106位为T碱基，将其命名为TT基因型；③电泳呈现三条带，大小分别为332bp、106bp和226bp，则该位点处于杂合状态，将其命名为CT基因型；所述公鸡心脏性状是指心脏重和心脏比率，所述公鸡心脏生长发育的标记基因型为CC。

2. 根据权利要求1所述的一种预示和鉴定公鸡心脏生长发育的分子标记方法，其特征在于，步骤3）所述的PCR扩增，是25μl反应体系，由下列成分组成：

10×PCR reactionbuffer     2.5μl

2.5mM dNTPMixture          2.0μl

10μM引物TCF21-F            0.5μl

10μM引物TCF21-R            0.5μl

5U/μlEX-Taq                0.25μl

去离子水                   18.25μl

50ng/μl的基因组DNA         1.0μl

PCR扩增条件为：94℃变性5min；94℃30sec，61.8℃ 30sec，72℃ 30sec，35个循环；72℃延伸10min。

3. 根据权利要求1或2所述的一种预示和鉴定公鸡心脏生长发育的分子标记方法，其特征在于，步骤4）所述的酶切，是10μl反应体系，由下列成分组成：3~5U的内切酶，1μl 的Buffer，0.3~0.5μg的PCR 产物，添加去离子水至10μl；37℃反应3小时。