[发明专利]一种血塞通注射剂物质基础数据库的建立方法

权利要求书

1.一种血塞通注射剂物质基础数据库的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：

分别取供试品溶液和对照品溶液，利用UPLC-Orbitrap HRMS进行分离和鉴定，所述UPLC-Orbitrap HRMS的色谱条件和质谱条件如下：

色谱条件：Brige Shield RP18色谱柱；流动相A为0.08vt％～0.12vt％甲酸水溶液，流动相B为乙腈；梯度洗脱程序为：0min，18％B；10min，18％B；28min，26％B；51min，30％B；67min，39％B；85min，64％B；

质谱条件：

工作模式：ESI^-，Full MS/dd-MS²(TopN)模式，扫描范围m/z 150～2000，分辨率60000～80000；

离子源参数：鞘气流速60～70arb，辅助气流速15～25arb，吹扫气流速3～5arb，喷雾电压2.0～3.0kV，毛细管温度280～320℃，S-lens电压45～55V，加热温度450～550℃；

根据CID裂解所产生的中性丢失碎片，判断对照品所连接糖基种类与数量，同时推断端基位糖基类别；

供试品中未知化合物根据高分辨质谱数据预测分子组成，并根据其多级质谱碎片信息推断化合物所连接糖基个数与种类，与已知化合物的分子质量、化学结构、保留时间和质谱裂解行为比对，进行化合物推断；

所得质谱图、MSn质谱树、色谱图、化学结构和未知化合物特性的自定义库利用Database Manager建立数据库。

2.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述对照品为：从血塞通注射剂样品中分离出15种皂苷成分RSZG-1～RSZG-15，并分别鉴定为三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、20(S)-人参皂苷Rf、20(S)-人参皂苷Rh1、20(S)-人参皂苷Rg2、人参皂苷Rb1、20(S)-人参皂苷F1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rc、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rd、人参皂苷Rk3、人参皂苷Rh4、人参皂苷Rg3，作为对照品溶液成分。

3.根据权利要求2所述的建立方法，其特征在于，所述从血塞通注射剂样品中分离出15种皂苷单体RSZG-1～RSZG-15具体为：

采用D101大孔树脂对血塞通注射剂样品水溶液进行分离，依次用水、30vt％乙醇水溶液、50vt％乙醇水溶液、70vt％乙醇水溶液、90vt％乙醇水溶液洗脱，得到50vt％乙醇洗脱液、70vt％乙醇洗脱液、90vt％乙醇洗脱液；

所述50vt％乙醇洗脱液经MDS柱色谱，用30vt％～90vt％甲醇水溶液进行梯度洗脱得到三个部位Fr.1、Fr.2、Fr.3；

所述Fr.1经MCI柱色谱，用40vt％～60vt％甲醇水溶液进行梯度洗脱得到两个流分Fr.1.1、Fr.1.2，所述Fr1.1通过50％乙醇水溶液重结晶得RSZG-12；所述Fr.1.2经RP-ODS柱色谱，用40vt％～65vt％甲醇水溶液进行梯度洗脱，再经Sephadex LH-20柱纯化得RSZG-11、RSZG-13；

所述Fr.2经硅胶柱色谱，用体积比为(100：18：0.5)～(80：20：0.1)氯仿-甲醇-水梯度洗脱得2个流分Fr.2.1、Fr.2.2；所述Fr.2.1经Sephadex LH-20柱纯化得RSZG-10；所述Fr.2.2经半制备液相色谱纯化得RSZG-4、RSZG-5；

所述Fr.3经RP-ODS反相柱色谱，用40vt％～60vt％甲醇水溶液进行梯度洗脱，再经反复Sephadex LH-20柱色谱纯化得RSZG-1、RSZG-9；

所述70vt％乙醇洗脱液经硅胶柱色谱，用体积比为(100：3：0.1)～(7：3：0.5)氯仿-甲醇-水梯度洗脱得Fr.4、Fr.5、Fr.6；所述Fr.4经反复硅胶色谱、Sephadex LH-20柱色谱纯化得到RSZG-3；所述Fr.5经ODS反相柱色谱，用65vt％～85vt％甲醇水溶液进行梯度洗脱得2个流分Fr.5.1、Fr.5.2；所述Fr.5.1经Sephadex LH-20柱色谱纯化得RSZG-8；所述Fr.5.2经半制备液相色谱纯化得RSZG-6、RSZG-7；所述Fr.6经MDS反相柱色谱，用55vt％甲醇水溶液洗脱，再经甲醇重结晶得RSZG-2；

所述90vt％乙醇洗脱液经硅胶柱色谱，用体积比为100：(1～50)：50石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，所述石油醚的温度为60～90℃，再经反复Sephadex LH-20柱色谱纯化得RSZG-14、RSZG-15。