[发明专利]一种来源于深海真菌新型转录调控因子DcGliZ及其应用

说明书

本发明公开了一种来源于深海真菌新型转录调控因子DcGliZ及其应用。其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明首次公开了一种新型深海真菌埃德菌转录调控因子DcGliZ，并对其体外功能进行了验证，经EMSA分析，DcGliZ与胶霉毒素生物合成基因的启动子pG、pM和pN存在凝胶阻滞条带。证实了DcGliZ在体外与胶霉毒素生物合成基因启动子pN、pM和pG的相互作用，从而为后期通过转录调控等代谢工程手段提高胶霉毒素产量并获得新型胶霉毒素类化合物奠定分子生物学基础。

技术领域

本发明涉及生物化学和分子生物学领域，具体涉及一种新型深海真菌埃德菌转录调控因子DcGliZ及其应用。

背景技术

深海真菌由于其处于高压、高盐、缺氧、低温、寡营养等独特的环境而具有独特的代谢途径，因此成为获取新型具有生物学活性新型天然产物的重要来源。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种来自深海真菌埃德菌的新型转录调控因子DcGliZ。

本课题组从深海真菌Dichotomomyces cejpii FS110中获得了8种结构新颖的新型胶霉毒素，其中部分具有显著的抗肿瘤活性。在此基础上，本课题组对D.cejpii FS110进行了全基因组测序，预测了胶霉毒素的生物合成基因簇，其与已知胶霉毒素基因簇的同源性低于20％。

本发明的第一个目的是提供一种转录调控因子DcGliZ，其核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

经本发明人研究发现，转录调控因子DcGliZ是一种正向调控真菌胶霉毒素生物合成的转录调控因子，转录调控因子DcGliZ的缺失会阻断胶霉毒素的生物合成，因此转录调控因子D cGliZ对于胶霉毒素的生物合成至关重要。本项目组从D.cejpii FS110从中发现了新型转录调控因子DcGliZ，与已知的GliZ转录调控因子同源性最高仅为43％，D.cejpii中gliZ基因在基因簇中的位置与其他真菌中GliZ在基因簇中的位置有显著差异，预示着D.cejpii独特的胶霉毒素生物合成转录调控机制。为了后期通过对D.cejpii FS110的胶霉毒素进行转录调控以获得更多活性更显著的新型胶霉毒素及其衍生物，需要对其生物合成转录调控功能进行解析。

因此，本发明的第二个目的是提供转录调控因子DcGliZ序列在调控胶霉毒素的生物合成基因簇合成胶霉毒素中的应用。

本发明的第三个目的是提供转录调控因子DcGliZ在调控gliG的启动子pG、gliM2的启动子pM或gliN的启动子pN中的应用。

本课题组前期从深海真菌D.cejpii FS110中获得了8种结构新颖的新型胶霉毒素。但D.cejpii中胶霉毒素类化合物的生物合成及转录调控机制尚未阐明，因此需要对D.cejpii FS110中胶霉毒素转录调控因子进行解析。本发明首次公开了一种新型深海真菌埃德菌转录调控因子DcGliZ，并对其体外功能进行了验证，经EMSA分析，DcGliZ与胶霉毒素生物合成基因的启动子pG、pM和pN存在凝胶阻滞条带。证实了DcGliZ在体外与胶霉毒素生物合成基因启动子pN、pM和pG的相互作用，从而为后期通过转录调控等代谢工程手段提高胶霉毒素产量并获得新型胶霉毒素类化合物奠定分子生物学基础。

附图说明

图1为新型转录调控因子DcGliZ的克隆及重组表达载体的构建。lane 1,2kbMarker；Lane2,gliZ基因PCR产物；

图2为DcGliZ转录调控蛋白的表达纯化及Western blot验证；Lane 1,70kDamarker；l ane 2,复性纯化后的DcGliZ蛋白；lane 3,Western blot验证DcGliZ蛋白；Lane4,60kDa marker；