[发明专利]可用于转导真核细胞的基于病毒的载体组合物

权利要求书

1.纯化的基于RNA的病毒载体组合物，相比如存在于无血清细胞培养基中的基于粗RNA的病毒载体的组合物，其包含小于2％的初始蛋白污染物和小于70%至多达90%，优选小于30%的初始DNA污染物，所述组合物能够转导真核细胞而不影响细胞生存力。

2.权利要求1的基于RNA的病毒载体组合物，其中所述基于粗RNA的病毒载体是其中物理颗粒/转导单位(PP/TU)包括在100：1至多达900：1之间，优选100：1至多达600：1之间，更优选100：1至多达400：1之间的病毒载体。

3.权利要求1或2的基于RNA的病毒载体，其中所述病毒载体对细胞增殖、生存力和/或细胞的能力，例如干细胞分化或例如原代细胞重编程为多能细胞的能力，具有很少至没有影响。

4.包含在细菌宿主中的病毒DNA构建体，所述细菌宿主以保藏号CNCM I-4487或CNCMI-4488或CNCM I-4489保藏在CNCM保藏中心。

5.权利要求1至3中任一项的基于RNA的病毒载体的用途，其用于转导真核靶细胞以将目的核酸(转基因)转移到所述细胞中。

6.用于制备修饰的真核细胞的方法，其中通过根据权利要求1-3中任一项的纯化的基于RNA的病毒载体组合物转导所述细胞而不影响它们的生存力。

7.用于生产基于RNA的逆转录病毒颗粒的方法，其包括：

(i) 转染生产细胞，所述细胞经过修饰以补充在病毒载体所基于的RNA病毒基因组中的缺失，并且在合适的条件下培养所述生产细胞，以允许病毒载体颗粒的生产，其中所述转染后的培养在无血清培养基中进行；

(ii) 收集包含所述基于RNA的病毒载体颗粒的上清液。

8.权利要求7的方法，其不包括丁酸钠诱导的步骤。

9.权利要求7或8的方法，其中所述上清液收集通过以特定时间间隔的包括在3个和6个之间的多个步骤进行。

10.权利要求7-9中任一项的方法，其中在所述上清液收集之后，通过离心澄清。

11.权利要求7-10中任一项的方法，其进一步包括切向超滤和渗滤的步骤，所述超滤优选在聚砜中空纤维滤芯上操作。

12.权利要求7-11中任一项的方法，其进一步包括离子交换层析的步骤。

13.可通过根据权利要求7-12中任一项的方法获得的纯化的基于RNA的病毒载体组合物。

14.权利要求13的基于RNA的病毒载体组合物，其中去除的DNA污染物占70至99％之间，优选多达71%的存在于初始无血清培养基的这种污染物，并且去除的细胞蛋白污染物占50至99.9％之间，优选多达56%的包含在初始无血清培养基中的细胞蛋白，并且其中所述PP/TU比例包括100：1至900：1之间，优选100：1和600：1之间。

15.制备遗传修饰的真核细胞的方法，其包括使真核细胞接触权利要求1-3，13或14中任一项的基于RNA的病毒载体组合物。

16.修饰的真核细胞，其中所述细胞通过根据权利要求1-3，13或14中任一项的基于纯化的RNA的病毒载体组合物转导而不影响其生存力。