[发明专利]用于乳腺癌HER2基因检测的引物组、试剂盒及方法

说明书

本发明公开了用于乳腺癌HER2基因检测的引物组、试剂盒及方法，利用本发明可以简便、高通量地检测乳腺癌患者中HER2基因是否发生扩增，与检测金标准FISH法相比，具有检测灵敏度高、时间短、价格低廉、通量高的优势，适合于大规模临床开展，进而，可为临床医生选择靶向药物提供参考，降低治疗风险以及减轻患者负担。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，具体涉及用于乳腺癌HER2基因检测的引物组、试剂盒及方法。

背景技术

原癌基因人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2，HER2)基因，即c-erbB-2基因，定位于染色体17q12-21.32上，具有酪氨酸激酶活性。它会抑制细胞凋亡，促进增殖，增加肿瘤细胞的侵袭力。HER2基因突变检测是预测HER2靶向疗法潜在效果的生物标志。大约有20％-30％原发浸润性乳腺癌患者表现为HER2阳性，就是细胞表面HER2蛋白受体表达大量增加，导致HER2基因细胞核内拷贝数增加。相较于其它类型的乳腺癌，HER2阳性乳腺癌进展速度更快、恶性程度更高，同时也更容易发生其他部位的转移，预后情况也相对较差。

赫赛汀是一种可以抑制HER2过表达肿瘤细胞增殖的单抗药物，所以对于HER2阳性乳腺癌患者而言，准确的判断对确保最有可能获益的患者接受HER2靶向治疗至关重要；同时，那些不太可能获益的人可以避免与这些药物有关的副作用和成本。

目前临床已有的检测方法包括免疫组化和原位杂交。免疫组化就是利用免疫显色反应在蛋白水平上对福尔马林固定的石蜡切片进行HER2过表达检测。原位杂交就是利用特别设计的核酸探针与固定的细胞内HER2基因进行序列杂交，缺点是耗时较长，价格较高，无法得到确切的阳性结果。对于HER2免疫组化阳性结果不确定的情况，还需要用FISH方法检测确定HER2基因扩增状态。虽然FISH技术被认为是目前检测HER2基因是否扩增的“金标准”。但是其检测操作繁琐，流程较长，不同的抗体敏感性存在差异，在实验室很难进行标准化的检测。

发明内容

针对上述传统乳腺癌HER2基因检测方法中存在的操作繁琐、准确性低、敏感性不高、难以标准化等问题，本发明基于HS-MSH技术提供了用于乳腺癌HER2基因检测的引物组、试剂盒及方法，操作简单、准确性高、敏感性高且统一化标准。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

本发明提供了一种用于乳腺癌HER2基因检测的引物组，包括HER2正向引物和HER2反向引物，所述HER2正向引物和HER2反向引物包括：

HER2正向引物F1：5'-ACATCCTGCTGTGGAGGACT-3'，

HER2反向引物R1：5'-CGCCACGACTGGCTAATTT-3'；

HER2正向引物F2：5'-ACTAGTTATTGGGCCGGACA-3'，

HER2反向引物R2：5'-CGCCACGACTGGCTAATTT-3'；

HER2正向引物F3：5'-TTTGCTACAGTGCAAAGACAC-3'，

HER2反向引物R3：5'-GGTGGTCTCGAACTCCTGAC-3'。

优选地，上述引物组还包括TSN内参基因的引物：

TSN正向引物F4：5'-F1CCCATCACAGGACCAGAAGT-3'，

TSN反向引物R4：5'-AGCTGCCAAGCCTCCTTTAT-3'。

本发明还提供了一种包括上述引物组的试剂盒。

优选地，上述试剂盒还包括PCR反应液、标准品、阳性对照品、阴性对照品和饱和荧光染料。