[发明专利]一种组合蛋白及其应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，公开了一种组合蛋白及其应用。本发明所述组合蛋白为包括细粒棘球绦虫EgFABP蛋白和EgA31蛋白的组合蛋白；或为细粒棘球绦虫EgFABP蛋白和EgA31蛋白的融合蛋白。本发明以细粒棘球绦虫EgFABP蛋白和EgA31蛋白作为抗细粒棘球绦虫和/或豆状带绦虫蛋白进行免疫实验，结果显示两个蛋白对犬表现出较好的免疫保护作用，并能够产生稳定的抗体，具备开发犬用带科绦虫通用疫苗的潜力。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种组合蛋白及其应用。

背景技术

细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)隶属于带科棘球属，其幼虫(细粒棘球蚴)寄生于人畜肝脏和肺等实质器官引起细粒棘球蚴病(echinococcosis)(又称囊性包虫病cystic echinococcosis，CE)，该病呈世界性分布，严重危害人畜健康，同时造成全球严重的经济损失，带来许多公共卫生问题。我国是该病的高发国家之一，流行区域达368个县。包虫病为我国二类动物疫病，是我国优先防治和重点防范的16种动物疫病之一。

豆状带绦虫(Taenia pisiformis)的中绦期幼虫为豆状囊尾蚴(Cysticercuspisiformis)，寄生于兔体内引起豆状囊尾蚴病。本病呈世界性分布，在我国流行于四川、重庆、山东等23个省区。豆状囊尾蚴在肝脏移行过程中，可引起肝组织的损伤、出血和增生等病变，对肝脏造成严重损伤，除直接造成兔死亡外，还可引起兔生产性能下降和抗病力低下，从而引发其它疾病的发生，造成兔养殖业的利润降低。

犬是细粒棘球绦虫和豆状带绦虫的终末宿主和传染源。目前采用的防控措施是“犬犬驱虫，月月驱虫”。由于长期使用化学药物，出现了耐药性、药物残留、环境污染等一系列问题。而疫苗具有安全、无残留、动物无休药期的优点，免疫终末宿主是防控该病的重要措施之一。在我国农牧区，犬的总数量远小于家畜数量，因此对犬进行疫苗预防更经济且更利于实施。目前，尚未有高效且商业化的细粒棘球绦虫及带科绦虫通用疫苗，因此筛选高效的疫苗抗原是今后重点研究方向之一。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种组合蛋白，使其对犬表现出较好的免疫保护作用，并能够产生稳定的抗体，可作为一种同时针对细粒棘球绦虫和豆状带绦虫的通用候选疫苗；

本发明的另外一个目的在于提供上述组合蛋白或其编码序列在制备预防细粒棘球绦虫和/或豆状带绦虫的疫苗中的应用；

本发明的另外一个目的在于提供利用上述组合蛋白制备的预防细粒棘球绦虫和/或豆状带绦虫的疫苗。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种组合蛋白，其为包括细粒棘球绦虫EgFABP蛋白和EgA31蛋白的组合蛋白；或为细粒棘球绦虫EgFABP蛋白和EgA31蛋白的融合蛋白。

在本发明具体实施方式中，将EgFABP和EgA31片段以酶切位点为连接臂融合形成EgFABP-EgA31基因，全长984bp，编码325个氨基酸，原核表达获得的重组rEgFABP-EgA31融合蛋白；其中，所述细粒棘球绦虫的EgFABP蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述细粒棘球绦虫的EgA31蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。所述融合蛋白中的连接臂为酶切位点，在具体实施方式中，本发明根据所选载体质粒以EcoRⅠ酶切位点(GAATTC)为连接臂。

以所述融合蛋白辅以免疫佐剂免疫土种犬或比格犬，每只犬肌肉注射200μg蛋白免疫复合物，一共免疫2次，每次间隔两周，二免后攻虫，28天后剖检犬进行虫体计数和虫体长宽度测量。在犬的豆状带绦虫和细粒棘球绦虫免疫保护组中，rEgFABP-EgA31组的减虫率分别达65.38％和67.00％，且免疫组的虫体长度和宽度均小于对照组，结果表明rEgFABP-EgA31对犬的豆状带绦虫和细粒棘球绦虫有较好的免疫保护作用。