[发明专利]一种茶树炭疽病菌Colletotrichum camelliae的检测方法

说明书

本发明涉及一种茶树炭疽病菌Colletotrichum camelliae的检测方法，将提取茶树叶片基因组DNA，分别用特异性引物CcGAPDH‑F/CcGAPDH‑R和Cs18SrDNA1‑F/Cs18SrDNA1‑R通过荧光定量PCR的方法扩增基因组DNA，得到扩增Ct值，计算2^‑ΔCt值，获得2^‑ΔCt(CcGAPDH)和2^‑ΔCt(Cs18SrDNA1)的比值，根据比值的大小，可以比较该病原菌发病的程度。本发明可以检测和监控产茶区Colletotrichum camelliae的发生、扩展和流行，并广泛用于茶树品种的抗性筛选，以及判定不同病原菌的致病性差异，尤其是其采用病原菌的序列跟寄主植物的序列比对，更能随着时间的变化监控病原菌的发展。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种茶树炭疽病菌Colletotrichumcamelliae的检测方法，应用在茶树炭疽病的早期诊断、病菌的监测和鉴定中，尤其适用于茶树抗性品种的鉴定和病原菌致病力的评价。

背景技术

茶是由茶树(Camellia sinensis(L.)O.Kuntze)的新芽制作得到。迄今，国际上记载的导致茶叶减产的茶树病害有300多种，危害部位包含茶树的叶片、根部、茶花以及果实等。由于茶树的收获部位是新稍，因此，茶树叶部病害的危害性比其他作物的叶病更大。

在我国有记载的茶树病害约100种以上，近年来，由于大幅度改善肥水条件和大面积推广无性系良种，病害更加呈上升趋势，茶树炭疽病是茶树的主要叶部病害之一。茶树炭疽病菌Colletotrichum camelliae是引起茶树炭疽病的优势病原菌之一，广泛分布于我国各大产茶区。

目前，关于茶树品种抗病性以及病原菌致病性的分析依赖于利用叶片感染部位的损伤大小来量化病原菌的生长。上述方法的缺点是不能敏锐的检测致病过程中的微小变化，也不能准确定量感染早期病原体的生长。

发明内容

本发明提供一种编码茶树炭疽菌Colletotrichum camelliae GAPDH的基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，长度为82bp，命名为CcGAPDH。将此核苷酸序列在国际基因库中进行检索，发现属于3-磷酸甘油醛脱氢酶。本发明提供一种扩增上述的编码茶树炭疽菌Colletotrichum camelliae GAPDH的基因的特异性引物，核苷酸序列如SEQ ID NO.2、SEQID NO.3所示，命名为CcGAPDH-F、CcGAPDH-R。本发明提供一种从茶树Camellia sinensis基因组中克隆得到的18SrDNA序列，命名为Cs18SrDNA1，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，序列长度为167bp。本发明提供一种扩增上述的从茶树Camellia sinensis基因组中克隆得到的18SrDNA序列的特异性引物，核苷酸序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示，分别命名为Cs18SrDNA1-F和Cs18SrDNA1-R。

本发明提供一种茶树炭疽病菌Colletotrichum camelliae的检测方法，具体步骤如下：

步骤一、提取茶树叶片的基因组DNA，所述的茶树叶片包含发病叶片和不发病叶片；

步骤二、用所述的引物CcGAPDH-F、CcGAPDH-R通过荧光定量PCR的方法扩增步骤一中得到的基因组DNA，得到Ct值，计算2^-ΔCt值；

步骤三、用所述的引物Cs18SrDNA1-F、Cs18SrDNA1-R通过荧光定量PCR的方法扩增步骤一中得到的基因组DNA，得到Ct值，计算2^-ΔCt值；