[发明专利]用于检测生物组分的方法和系统

权利要求书

1.一种扩增一种或多种目标多核苷酸的方法，所述方法包括：

(a)在液滴中从样品中裂解一种或多种含有多核苷酸的组分以在裂解液滴中形成裂解物并在蛋白酶存在下孵育所述裂解物以促进蛋白酶活性，所述裂解物包含所述一种或多种目标多核苷酸且所述裂解液滴是不混溶的载体流体；

(b)灭活所述蛋白酶；

(c)向所述液滴中直接皮可注射试剂，所述试剂用于进行核酸扩增反应以在扩增液滴中形成扩增混合物，所述扩增液滴是在所述不混溶的载体流体中；以及

(d)在所述扩增液滴中扩增所述一种或多种目标多核苷酸；

其中，在步骤(d)之前不从所述裂解液滴或从所述扩增液滴中选择性除去试剂。

2.一种扩增一种或多种目标多核苷酸的方法，所述方法包括：

(a)在液滴中使用蛋白酶从样品中裂解一种或多种含有多核苷酸的组分以在裂解液滴中形成裂解物，所述裂解物包含所述一种或多种目标多核苷酸且所述裂解液滴是不混溶的载体流体；

(b)灭活所述蛋白酶；

(c)向所述液滴中皮可注射试剂用于进行核酸扩增反应以在扩增液滴中形成扩增混合物，所述扩增液滴是在所述不混溶的载体流体中；以及

(d)在所述扩增液滴中扩增所述一种或多种目标多核苷酸；其中，步骤(a)的所述蛋白酶在步骤(c)之前是灭活的。

3.如权利要求1或2所述的方法，所述扩增液滴的体积是0.001至1000皮升。

4.如权利要求3所述的方法，所述扩增液滴的直径是0.1微米至1000微米。

5.如权利要求1或2所述的方法，所述含有多核苷酸的组分是细胞、病毒或孢子。

6.如权利要求1或2所述的方法，其中，步骤(c)包括(i)将所述裂解液滴与包含所述用于进行核酸扩增反应的试剂的流体流融合，以及(ii)从所述流体流形成所述扩增液滴。

7.如权利要求1或2所述的方法，其中，通过液滴聚结将所述用于进行核酸扩增反应的试剂添加至所述裂解液滴。

8.如权利要求5所述的方法，所述裂解液滴含有单细胞裂解物。

9.如权利要求1或2所述的方法，所述一种或多种目标多核苷酸是DNA。

10.如权利要求1或2所述的方法，所述一种或多种目标多核苷酸是RNA。

11.如权利要求10所述的方法，其中，扩增包括逆转录以生成逆转录产物。

12.如权利要求1或2所述的方法，所述用于进行核酸扩增反应的试剂包括用于扩增多个不同目标多核苷酸的试剂。

13.如权利要求1或2所述的方法，所述一种或多种目标多核苷酸对应于癌基因。

14.如权利要求1或2所述的方法，所述方法还包括检测是否存在步骤(d)中扩增的扩增产物的步骤。

15.如权利要求14所述的方法，其中，检测是否存在扩增产物包括在所述扩增液滴中对检测组分进行检测。

16.如权利要求14所述的方法，其中，检测是否存在扩增产物包括对所述扩增产物进行测序。

17.如权利要求14所述的方法，其中，检测是否存在扩增产物包括形成双重乳液，所述双重乳液包含外部液滴内的扩增液滴，并基于液滴尺寸和荧光分选所述双重乳液。

18.如权利要求14所述的方法，所述方法还包括基于检测步骤的结果分选所述扩增液滴的步骤。