[发明专利]利用四角蛤蜊DMRT基因检测海洋中PBDEs的方法有效
| 申请号： | 201911041592.0 | 申请日： | 2019-10-30 |
| 公开（公告）号： | CN110527732B | 公开（公告）日： | 2020-02-04 |
| 发明（设计）人： | 房燕;梁欢;柳茂生;王一奇;姚蕾;邹强;王维忠;付建革;柯可 | 申请（专利权）人： | 鲁东大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 11429 北京中济纬天专利代理有限公司 | 代理人： | 马国冉 |
| 地址： | 264025 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 四角蛤蜊 相对表达量 基因 检测 反转录合成 基因检测 荧光信号 早期预警 可信度 负相关 检出限 取样点 采样 成体 扩增 性腺 内参 灵敏 溶解 绘制 便利 海洋 污染 环保 | ||
1.利用四角蛤蜊DMRT基因检测海洋中PBDEs的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：在待测海水或海洋沉积物的取样点取雄性四角蛤蜊成体，提取性腺RNA，以该性腺RNA为模板反转录合成cDNA；
步骤二：对于任意一个四角蛤蜊样品，对其DMRT基因和GAPDH基因按照如下反应体系分别进行扩增：
cDNA 1μL、实时定量PCR反应混合液 10μL、正向引物 0.4μL、反向引物0.4μL、水8.2μL；
其中，用于检测四角蛤蜊DMRT基因的引物的序列信息如下：
正向引物DF：GTTCTGCTGCGGACAGGTAT
反向引物DR：TAAGACGCCCATCTCACG
用于检测四角蛤蜊GAPDH基因的引物的序列信息如下：
正向引物GF：CGTATTGGTCGTCTTGTTGTTAG
反向引物GR：TTAGCAGGGTCTTTCTCGTTAT
扩增结束后绘制溶解曲线；
步骤三：通过检测SYBRGreen在PCR 反应过程中荧光信号的变化，得到每个PCR 反应的Ct 值，然后以GAPDH基因为内参，采用2−△△CT 法对结果进行分析，计算出DMRT 基因的相对表达量，DMRT基因的相对表达量与PBDEs的浓度呈现显著负相关，测定DMRT基因的相对表达量就可以反映海水或海洋沉积物被PBDEs污染的状况。
2.根据权利要求1所述的利用四角蛤蜊DMRT基因检测海洋中PBDEs的方法，其特征在于，在步骤二中，按照如下PCR条件进行扩增：
95℃预变性5min，1 个循环；95℃变性15s，60℃退火30s，40 个循环。
3.根据权利要求1所述的利用四角蛤蜊DMRT基因检测海洋中PBDEs的方法，其特征在于，在步骤二中，PCR扩增使用的试剂盒是SYBR GreenQRT-PCR 试剂盒。
4.根据权利要求1所述的利用四角蛤蜊DMRT基因检测海洋中PBDEs的方法，其特征在于，在步骤二中，扩增结束后，对部分扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳、测序以验证扩增的特异性和准确性。
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