[发明专利]一种抗虹彩病毒的核酸适配体及其构建方法和应用

说明书

一种抗虹彩病毒的核酸适配体，包括如下核苷酸序列：CCCAACTCGCTAAGATTAACCAAATGAAAGGCGCCGTAACCTGGATGCTT。本发明提供的核酸适配体的分子量较小，制备周期短，重现性好，便于体外化学合成，便于标记，序列稳定易于运输和保存。该核酸适配体对石斑鱼虹彩病毒具有较高的特异性和亲和力，并且无免疫原性。

技术领域

本发明属于水产病原菌检测技术领域，具体地，涉及一种抗虹彩病毒的核酸适配体及其构建方法和应用。

背景技术

向海洋进军，全力推动海洋经济的发展已成为我国的重要战略。广西是连接东盟的国际交通枢纽，毗邻东南亚等海产品主要的消费市场，近年来海水养殖业发展迅速。其中，石斑鱼肉质细腻，营养丰富，作为大宗名贵的海水养殖鱼类，目前国内石斑鱼养殖年产量已达13万吨以上，产业直接产值超过百亿元，经济价值极高。然而随着石斑鱼养殖密度的增加、养殖规模的扩大，近海养殖环境出现变差趋势，日益恶化的养殖水域环境导致各种病害频繁暴发，造成了巨大经济损失。其中，石斑鱼虹彩病毒是导致石斑鱼发病的主要病毒性病原，其所导致的鱼病致死率极高，被称为“海洋口蹄疫”。目前，国际上已对石斑鱼虹彩病毒进行了系统研究，主要包括流行病学调查、病原的分离鉴定、敏感细胞系构建、病毒超微结构观察和病毒的诊断技术开发等，在一定程度上揭示了石斑鱼虹彩病毒的感染和致病机理。2018年广西北海地区池塘养殖的珍珠龙胆石斑鱼中暴发疑似石斑鱼虹彩病毒病，通过对患病石斑鱼中病原微生物进行聚合酶链式反应检测技术(polymerase chain reation,PCR)分析鉴定，证明石斑鱼虹彩病毒(grouper iridovirus,SGIV)是主要致病病原。因此研发操作便捷、成本低、耗时短、准确度高的检测技术，对于控制石斑鱼SGIV病毒的危害极其重要。但是目前针对石斑鱼SGIV病毒的诊断方法主要是普通PCR技术、巢式PCR技术、荧光定量PCR 技术等。PCR技术检测结果精确可靠，但却存在操作繁琐、耗时长、仪器试剂昂贵等不足，无法满足现场快速准确检测诊断的要求。因此应着力发展操作便捷、成本低、耗时短、准确度高、可用于养殖现场的石斑鱼SGIV病毒快速检测技术和功能产品，这对于及早发现、确定病原，进而有的放矢地制定治疗方案来控制病原扩散、降低损失至关重要。

核酸适配体是利用指数富集的配基系统进化技术(Systematic Evolution ofLigands by Exponential Enrichment technology,SELEX)，从人工合成的随机序列文库中在体外经过多轮筛选获得的、能够特异性识别靶物质的单链寡核苷酸。核酸适配体具有特异性高、亲和性高、稳定性强、易化学合成和化学修饰等诸多优点。基于适配体能够高特异性识别病原微生物或病变细胞的特性，适配体被广泛用于生物传感器的构建，通过信号放大等实现对病原或疾病的精确检测诊断。目前核酸适配体作为一类新型的、广受关注的新型检测和治疗工具，在人类医学研究、疾病诊断、病毒侵染机制研究等领域展现出广阔的应用前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗虹彩病毒的核酸适配体及其构建方法和应用，以实现石斑鱼虹彩病毒的高灵敏度、高特异性检测。

根据本申请的一个方面，提供一种抗虹彩病毒的核酸适配体，包括SEQ ID NO.1的核苷酸序列。

优选地，包括SEQ ID NO.2的核苷酸序列。

优选地，其核苷酸序列上的至少一个核苷酸被磷酸化、巯基化、甲基化、氨基化或同位素化。

优选地，还包括有编码标志物的序列，标志物选自发光物质、生物素或酶中的一种或一种以上。

优选地，标志物为发光物质，发光物质选自羟基荧光素、异硫氰酸荧光素或羧基四甲基罗丹明中的一种或一种以上。