[发明专利]一种吸烟对卵母细胞质量影响的评估方法

说明书

本发明公开了一种吸烟对卵母细胞质量影响的评估方法，具体是将卵母细胞放在含有不同浓度可替宁的培养液中成熟培养。最后通过检测卵母细胞成熟率、染色体非整倍性、肌动蛋白的分布、线粒体膜电位、胞内活性氧水平、纺锤体形态、成熟卵母细胞染色体排列形态、体外受精后精子结合数量和孤雌激活后原核形成率等这些指标来评估吸烟对卵母细胞质量的影响。本发明通过大量的客观试验，评估了吸烟对卵母细胞质量的影响，为吸烟女性生殖能的维持提供了理论数据的参考。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种吸烟对卵母细胞质量影响的评估方法。

背景技术

据《光明日报》报道：在全球11亿吸烟者中，我国占了3.3亿，我国每年死于与吸烟有关疾病的约100万人，其余的吸烟者均处于亚健康状态。据研究报道，吸烟能够削减女性生殖能力。另外，如果女性在怀孕期间吸烟会使胎儿面临更高的自然流产和围产期死亡的风险，显著降低胎儿出生体重。但是关于吸烟是否直接对生殖系统，特别是对卵母细胞质量的影响仍未有相关研究报道。

香烟能够使人成瘾的主要原因是其尼古丁成分。可替宁(cotinine)被报道是烟草中的尼古丁在体内经细胞色素氧化酶2A6(CYP2A6)代谢后的产物，即尼古丁在体内的主要代谢产物和代谢产物前体，主要以等离子体形式存在血浆中。可替宁有促进神经系统兴奋作用，并在某些鼠类试验中反映出一定的抗炎、减轻肺水肿程度的作用。由于可替宁的半衰期较长(3～4d)且较稳定，因此成为测量吸烟者和被动吸烟者吸烟量的主要生物标志，一般情况下，多以血清中的可替宁浓度来评价。近期有研究成果显示，血浆中的可替宁浓度与血清中的可替宁浓度具有一致性，同样具有检测意义。Kendall V等人发现当在小鼠早期胚胎培养液中添加8mM的可替宁时，能够导致小鼠囊胚形成率显著下降；但是，当在小鼠胚胎培养液中添加少于8mM可替宁时，囊胚形成率与正常对照组相比，并没有显著性差异。目前并没有关于可替宁对卵母细胞质量影响的相关研究。

现有技术中并没有可替宁与卵母细胞质量的相关性研究，本发明通过在卵母细胞体外成熟培养液中添加不同浓度的可替宁来直接评估吸烟对卵母细胞质量的影响，并进一步评估吸烟者和被动吸烟者吸烟量是多少时，会引起卵母细胞质量下降，最终导致生殖能力减弱。本发明将为吸烟女性想要维持卵母细胞质量和生殖能力提供数据参考。

发明内容

本发明针对现有技术中没有可替宁与卵母细胞质量相关性的研究，提供了一种吸烟对卵母细胞质量影响的评估方法，通过在卵母细胞体外成熟培养液中添加不同浓度的可替宁来直接评估吸烟对卵母细胞质量的影响，并进一步评估吸烟者和被动吸烟者吸烟量是多少时，会引起卵母细胞质量下降，最终导致生殖能力减弱。

为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

一种吸烟对卵母细胞质量影响的评估方法，具体为在卵母细胞体外成熟培养液中添加不同浓度可替宁的溶液后，检测体外成熟卵母细胞质量。

进一步地，所述卵母细胞取自CD1小鼠。

进一步地，所述可替宁为(-)-cotinine。

进一步地，所述可替宁的溶液是采用DMSO配置得到。

进一步地，所述体外成熟卵母细胞质量的评价参数包括：卵母细胞成熟率、成熟卵母细胞活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位、染色体非整倍体、肌动蛋白(α-actin)分布表达、纺锤体形态、孤雌激活后原核率、体外受精结合精子数量和染色体的排列。

进一步地，所述不同浓度可替宁的溶液中可替宁的浓度为0-1000μmol/L。

进一步地，所述不同浓度可替宁的溶液中可替宁的浓度为0μmol/L、100μmol/L、500μmol/L、800μmol/L、1000μmol/L。