[发明专利]一种放射性肺损伤体外细胞模型及其构建方法和应用

说明书

本发明涉及一种放射性肺损伤体外细胞模型及其构建方法和应用，所述放射性肺损伤体外细胞模型是由以下方法构建：采用6MV X射线10Gy单次照射A549细胞，剂量率为2Gy/min，并在照射后继续培养第12h‑24h内检测放射性肺损伤相关指标。本发明还包括所述放射性肺损伤体外细胞模型在制备治疗/预防放射性肺损伤的药物及其致病机制中的应用。其优点表现在：克服了现有技术存在的缺陷：造模周期过长(通常需6个月以上)，且受到实验动物个体影响较大，可重复性低，在细胞机制方面的研究性价比低等。本发明的构建方法为放射性肺损伤机制研究以及治疗药物的研发提供了重要的研究技术支持，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及细胞生物学技术与应用技术领域，具体地说，是一种放射性肺损伤体外细胞模型及其构建方法和应用。

背景技术

肺癌是目前世界范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，放射治疗在肺癌的治疗中具有重要的作用。然而，在临床常见的胸部肿瘤放射治疗中，肺作为辐射中度敏感器官，肿瘤附近的肺组织因受到放射剂量超过其生物效应的阈值而产生不同程度的损伤。放射性肺损伤是胸部肿瘤放射治疗后常见的并发症之一，临床分为放射性肺炎期(放疗3-6个月内)和放射性肺纤维化期(放疗6个月以上)。目前临床中，常使用一些更为精准的放射技术来避免过多正常组织受到照射，从而允许更高剂量的放射治疗得到更大获益。然而，放射性肺损伤依然时有发生，这不仅降低局部肿瘤控制率，还严重影响患者生活质量。目前放射性肺损伤发生机制尚不明确，只能使用糖皮质激素这类不良反应明显的药物控制，如若不能早发现早治疗控制疾病进展，将会出现不可逆转的放射性肺纤维化，最终导致患者呼吸衰竭乃至死亡。因此，对于放射性肺损伤的作用机制研究以及相关新药的研发显得尤为重要。

目前，关于放射性肺损伤的基础研究大多以动物模型为主，即通过适当剂量(12-20Gy)单次照射大鼠或小鼠全胸，建立动物放射性肺损伤模型以进行后续实验，以肺系数、肺组织病理切片等作为评价放射性肺损伤的标准，其缺点是造模周期过长(通常需6个月以上)，且受到实验动物个体影响较大，可重复性低，在细胞机制方面的研究性价比低等。放射性肺损伤体外细胞模型可以很好的解决这些问题，但目前关于放射性肺损伤的体外细胞模型的研究较少，国际及国内尚无统一的建模方法及建模标准。

肺泡上皮细胞死亡是放射性肺损伤重要的病理生理过程之一。肺泡Ⅱ型上皮细胞死亡导致呼吸膜完整性受损，肺表面活性物质无法发挥正常作用，继而出现肺泡萎陷、微肺不张及肺水肿。因此，以肺泡Ⅱ型上皮细胞作为研究对象进行放射性肺损伤细胞模型构建具有代表性。本研究提供了一种建立体外放射性肺损伤细胞模型的方法，以人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549细胞为研究对象，通过不同剂量放射线干预后，采用CCK实验以及细胞克隆形成实验检测细胞的抑制率。为放射性肺损伤机制研究以及治疗药物的研发提供了重要的研究技术支持。关于本发明一种放射性肺损伤体外细胞模型及其构建方法和应用目前还未见报道。

发明内容

本发明的第一个目的是针对现有技术的不足，提供一种放射性肺损伤体外细胞模型。

本发明的第二个目的是针对现有技术的不足，提供如上所述放射性肺损伤体外细胞模型的构建方法。

本发明的第三个目的是针对现有技术的不足，提供如上所述放射性肺损伤体外细胞模型的用途。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：

一种放射性肺损伤体外细胞模型，所述放射性肺损伤体外细胞模型由以下方法构建：

a.复苏人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549细胞；

b.传代培养人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549细胞；

c.采用6MV X射线10Gy单次照射步骤b处理后得到的A549细胞，剂量率为2Gy/min，并在照射后继续培养第12h-24h内检测放射性肺损伤相关指标。

作为本发明的一个优选实施方案，步骤a的具体方法为：