[发明专利]一种采用发酵法生产谷胱甘肽的新方法在审
| 申请号： | 201911043790.0 | 申请日： | 2019-10-30 |
| 公开（公告）号： | CN110698536A | 公开（公告）日： | 2020-01-17 |
| 发明（设计）人： | 夏颖;贾伟;周雪美;王水淋 | 申请（专利权）人： | 江西诚志生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C07K5/037 | 分类号： | C07K5/037;C12P21/02;C12N1/16;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/18;C12R1/84 |
| 代理公司： | 36131 鹰潭市智埠专利代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 李水娣 |
| 地址： | 335000 江西省鹰*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 谷胱甘肽 发酵 毕赤酵母菌 发酵法生产 生产成本低 发酵过程 发酵条件 工艺步骤 工艺过程 目标产物 生产操作 生产过程 生产原料 斜面菌种 有机溶剂 培养基 制备 精制 生产 转化 优化 安全 | ||
1.一种采用发酵法生产谷胱甘肽的新方法，其特征在于：用毕赤酵母菌(P.pastoris)发酵生产谷胱甘肽，生产过程由下列工艺步骤组成：
(1)将毕赤酵母菌(P.pastoris)菌种接种到试管中的斜面培养基制成斜面菌种；
(2)将斜面菌种扩大培养作为种子液；
(3)将种子液接入发酵罐中进行发酵得到发酵液；
(4)加入反应物组分葡萄糖等；
(5)谷胱甘肽的分离纯化。
2.根据权利要求1所述一种采用发酵法生产谷胱甘肽的新方法，其特征在于：所述(1)步骤中的斜面培养基由下列重量份组分组成：酵母膏5-40份、葡萄糖5-40份、氨水0-40份、大豆蛋白胨3-30份、硫酸铵0-40份、氯化钾0-3份、尿素0-5份、磷酸氢二铵0-10份、硫酸镁0-5份、甘油0-10份、谷氨酸钠0-5份、甘氨酸0-5份、半胱氨酸0-5份和水适量。
3.根据权利要求1或2所述一种采用发酵法生产谷胱甘肽的新方法，其特征在于：所述斜面菌种的制备工艺条件为：pH值为4.0-7.5、温度25-40℃、培养时间为12-36小时。
4.根据权利要求1所述一种采用发酵法生产谷胱甘肽的新方法，其特征在于：所述(2)步骤中的种子液由下列重量份组分组成：葡萄糖40-80份、氨水0-40份、尿素0.1-5份、硫酸铵20-40份、磷酸氢二铵1-10份、氯化钾0.1-5份、硫酸镁0.1-5份、酵母膏1-20份、谷氨酸钠0.1-5份、甘氨酸0.1-5份、半胱氨酸0.1-5份和水1000份。
5.根据权利要求1所述一种采用发酵法生产谷胱甘肽的新方法，其特征在于：所述(3)步骤中发酵的工艺条件为：种子液接种量为6-12％，pH值为4.0-7.5，培养温度为25-40℃，通风量为10-300m3/h，搅拌转速为350-450转/分钟，培养时间为12-36小时。
6.根据权利要求1所述一种采用发酵法生产谷胱甘肽的新方法，其特征在于：所述(4)步骤中的反应条件为：葡萄糖物质量浓度为100-200mmol/l，反应温度为20-40℃，反应时间为24-48小时，搅拌转速为160-200转/分钟。
7.根据权利要求1所述一种采用发酵法生产谷胱甘肽的新方法，其特征在于：所述(5)步骤中的谷胱甘肽的分离纯化包括以下六个步骤：
a、将发酵完成后的发酵液菌体细胞破壁；
b、把经过a步骤后的发酵液通过膜过滤技术去除菌渣蛋白质等杂质；
c、把经过b步骤后的浓缩液进行铜盐反应。
d、把经过c步骤后进行硫化氢反应；
e、把经过d步骤的反应液进行过滤分离纯化；
f、把经过e步骤的浓缩液结晶干燥，即可得到纯度为98％以上的谷胱甘肽。
8.根据权利要求7所述一种采用发酵法生产谷胱甘肽的新方法，其特征在于：所述a步骤发酵液菌体细胞破壁；b步骤中的过滤膜为陶瓷膜或有机膜或纳滤膜；e步骤中的过滤分离技术采用大孔吸附树脂柱或阳离子树脂或模拟移动床色谱；f步骤过滤后的溶液经过浓缩、干燥，真空干燥真空度为0.05-0.5Mpa，温度为65℃，干燥后的成品纯度达99％以上。
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