[发明专利]一种金鱼缺氧诱导因子HIF-1α基因、克隆方法及应用

权利要求书

1.一种金鱼缺氧诱导因子HIF-1α基因，其特征在于：所述金鱼缺氧诱导因子HIF-1α基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。

2.如权利要求1所述的金鱼缺氧诱导因子HIF-1α基因编码的氨基酸，其特征在于：所述氨基酸的序列为SEQ ID NO.2。

3.如权利要求1所述的金鱼缺氧诱导因子HIF-1α基因的克隆方法，其特征在于：步骤如下：

步骤1：提取金鱼肝脏、鳃、脑、心脏组织总RNA，反转录得到cDNA；

步骤2：从NCBI数据库下载鲤鱼缺氧诱导因子HIF-1α基因的mRNA序列和蛋白序列，与金鱼转录组序列进行比对，该金鱼转录组序列的序列为SEQ ID NO.3，调取金鱼HIF-1α基因序列，设计3对引物对调取的转录组序列进行验证，以金鱼cDNA为模板，进行PCR扩增，胶回收，PCR产物纯化和测序，序列拼接得到金鱼HIF-1α基因中间片段；

步骤3：获取HIF-1α基因5’端序列；

步骤4：获取HIF-1α基因3’端序列；

步骤5：将步骤2-4获得的序列片段进行拼接，获得HIF-1α基因全长序列；

步骤6：根据HIF-1α基因的全长序列，利用FGENESH和ORF Finder软件预测该基因的开放阅读框ORF。

4.根据权利要求3所述的金鱼缺氧诱导因子HIF-1α基因的克隆方法，其特征在于：所述步骤2中3对引物序列为SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ IDNO.8和SEQ ID NO.9。

5.根据权利要求3所述的金鱼缺氧诱导因子HIF-1α基因的克隆方法，其特征在于：所述步骤3中需使用引物，引物序列为SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12。

6.根据权利要求3所述的金鱼缺氧诱导因子HIF-1α基因的克隆方法，其特征在于：所述步骤4中需使用引物，引物序列见SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14。

7.根据权利要求3至6任一项所述的金鱼缺氧诱导因子HIF-1α基因的克隆方法，其特征在于：所述步骤6中开放阅读框长2343bp，编码780个氨基酸。

8.如权利要求1所述的金鱼缺氧诱导因子HIF-1α基因在低氧环境下的调控方面中的应用。

9.如权利要求1所述的金鱼缺氧诱导因子HIF-1α基因编码的氨基酸在低氧环境下的调控方面中的应用。