[发明专利]一种新城疫病毒HN蛋白单克隆抗体1G4及其应用

说明书

本发明公开了一种新城疫病毒HN蛋白单克隆抗体1G4及其应用，属于生物技术领域。本发明从建立的分泌抗新城疫病毒单克隆抗体杂交瘤细胞库中筛选出一株杂交瘤细胞1G4株，用其制备的细胞上清和诱生小鼠腹水的单克隆抗体的病毒中和效价分别为2¹⁵和10⁸，该单克隆抗体识别的抗原表位是针对病毒HN蛋白的。另外，本发明检测方法用于检测动物血清中新城疫病毒血凝抑制抗体的效价，具有敏感性强、特异性高、稳定性好，适用于高通量检测血清样本，为养殖户科学评估新城疫疫苗免疫效果提供技术手段。

技术领域

本发明公开了一种新城疫病毒HN蛋白单克隆抗体1G4及其应用，属于生物技术领域。

背景技术

新城疫(Newcastle disease，ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)强毒株感染家禽引起的急性、烈性、高度接触性传染病，是我国《国家中长期动物疫病防治规划(2012—2020年)》中优先防治的一类动物疫病之一。

近年来该病呈现出新的流行特点，如非典型性新城疫、NDV新基因(亚)型出现、宿主范围扩大和毒力增强等，使新城疫防控复杂化。目前，在生产实践中典型性的新城疫已得到较好控制，但局部地区病毒污染比较严重，疫情呈持续性地方流行(丁壮，等.新城疫流行病学新特点及鹅新城疫防控策略.中国兽医学报,2015,35(1):38-40.)。

NDV为副黏病毒科副黏病毒属的禽副黏病毒I型，基因组为不分节段的单股负链RNA，基因组结构模式为3’-NP-P-M-F-HN-L-5’，依次编码六种结构蛋白：核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein，NP)、磷蛋白(Phosphor protein，P)、基质蛋白(Matrix protein，M)、融合蛋白(Fusion protein，F)、血凝素-神经氨酸酶蛋白(Heamagglutinin-Neuraminidase protein，HN)和大分子蛋白(Large protein，L)以及两种非结构蛋白(V蛋白和W蛋白)(王忠田,等.新城疫病毒分子生物学最新研究进展[J].动物医学进展,2002,23(2):33-36.)。其中，HN蛋白是主要的保护性抗原，传统新城疫检测技术所涉及的血凝试验和血凝抑制试验均是基于HN蛋白的生物学活性(即具有凝集红细胞的能力)(于霏,等.鸡新城疫诊断技术[J].兽医导刊,2009(9):30-32.)。然而，上述试验常受到多种因素影响，如敏感性差、误差较大、且每次检出的样品量少等，缺乏一定的可靠性，在大量样品检测时需要大量人力(达剑森,等.血凝抑制试验影响因素分析[J].畜牧与兽医,2013,45(9):108-109.)。ELISA具有特异性强、灵敏度高、稳定性好等优点，适用于大规模样品的检测，利用该方法的抗体检测对新城疫监测至关重要。