[发明专利]银缕梅微卫星标记组合及其引物和应用

说明书

本发明公开了一种银缕梅微卫星标记组合，其包括18个银缕梅微卫星标记，同时提供了一组能够高效扩增银缕梅微卫星标记的特异性引物组及银缕梅微卫星标记检测方法，可为银缕梅种质资源的开发及保护、遗传多样性分析、遗传图谱的构建、分子标记辅助育种及遗传结构的分析奠定基础。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种银缕梅微卫星标记组合及其引物和应用。

背景技术

银缕梅(Parrotia subaequalis)，隶属于金缕梅科(Hamamelidaceae)，是最古的老被子植物之一，是仅存我国被再发现的“活化石”树种，也是中国特有的单种属乔木树种，在植物进化史上有着承前(裸子植物)启后(被子植物)的重要地位。同时银缕梅也是一种珍贵的兼具观花和秋季观叶的优良绿化观赏树种。但由于其分布区狭小，呈间断岛屿状散布于天目山北段及大别山东南部，现存种群个体数量极少，已濒于灭绝。近年来有关银缕梅的研究主要集中于形态解剖、系统分类、生理生态、生物学特性及繁殖培育等方面，在分子水平的研究几乎空白。银缕梅SSR分子标记的开发可为银缕梅种质资源评价、遗传多样性分析、分子标记辅助育种、遗传连锁图谱的构建及功能基因的开发利用等提供依据。

简单序列重复(SSR)，又称作微卫星标记，是一类由1～6个核苷酸组成的基元串联重复的DNA序列。SSR属于一种基于PCR原理的分子标记，其在基因组中广泛存在。与其他分子标记相比，SSR分子标记具有共显性、多态性丰富、重复性和稳定性好等优点,且种属特异性强,广泛地分布于整个真核生物基因组中,是现阶段应用最广泛的分子标记技术之一。目前通过转录组测序技术开发SSR分子标记广泛应用于木本植物中，因此基于转录组测序获取银缕梅的SSR分子标记具有经济、可靠的特点，且具有十分重要的应用价值。

发明内容

本发明立足于现有银缕梅分子研究技术的空白，提供了一种银缕梅微卫星标记组合及其引物和应用，旨在为其种质资源的开发及保护、遗传多样性分析、遗传图谱的构建、分子标记辅助育种及遗传结构的分析奠定基础。

为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

一种银缕梅微卫星标记组合，包括以下18个银缕梅微卫星标记：PSSSR139、PSSSR10、PSSSR141、PSSSR17、PSSSR20、PSSSR111、PSSSR138、PSSSR127、PSSSR130、PSSSR150、PSSSR158、PSSSR76、PSSSR9、PSSSR74、PSSSR99、PSSSR71、PSSSR98和PSSSR151。

用于检测上述银缕梅微卫星标记组合的引物组，包括SEQ ID NO.1-36所示的引物。

用于检测上述银缕梅微卫星标记组合的试剂盒，包括上述引物。

进一步地，所述试剂盒还包括以下试剂：Premix Taq聚合酶和ddH₂O。

一种银缕梅微卫星标记的检测方法，包括以下步骤：

步骤1，提取银缕梅基因组DNA；

步骤2，合成SEQ ID NO.1-36所示的引物，并使用荧光染料对正向引物5’端进行标记，获得荧光标记后的银缕梅微卫星引物组；

步骤3，以步骤1提取的基因组DNA为模板，利用荧光标记后的银缕梅微卫星引物组进行PCR扩增获得扩增产物；

步骤4，对扩增产物中的单色荧光标记DNA片段进行检测和分析。

进一步地，所述荧光染料为FAM、HEX或TAMRA中的至少一种。

进一步地，所述的PCR反应体系为：总体积为30μL，含有Premix Taq聚合酶15μL，模板DNA 1μL(20ng/μL)，上下游引物各1μL，ddH₂O 12μL。