[发明专利]一种蜂蜜中蔗糖转化酶酶值的检测方法

权利要求书

1.一种蜂蜜中蔗糖转化酶酶值的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将蜂蜜溶解后离心，得到澄清液和沉淀，将所述沉淀复溶，得到复溶液，将所述澄清液进行超滤，得到的浓缩液稀释后再次超滤，得到的再次超滤浓缩液与所述复溶液混合定容，得到酶液；所述溶解、复溶或稀释用溶液为pH值4.0～6.8的缓冲液；所述超滤用滤膜的截留分子量为10K；

2)分别量取2mL所述酶液置于两支试管中，试管1为实验组，试管2为对照组，向试管2中加入1mL灭活液进行灭活，将试管1、试管2和蔗糖溶液在30～50℃条件下水浴10min，分别吸取蔗糖溶液2mL加至试管1和试管2中，在30～50℃条件下反应0.5～3.0h，向试管1中加入1mL所述灭活液终止反应；

3)从试管1和试管2中吸取相同体积的反应液1～3mL分别移置两个具塞比色管后，分别加入显色剂溶液0.25～3.5mL，在沸水浴中反应5min，冷却，用水将各具塞比色管溶液定容至刻度，将得到的两个具塞比色管中溶液于540nm波长下测定吸光度OD值，用定容至所述刻度的不含所述反应液的显色剂溶液做空白调零；

4)绘制还原糖标准曲线，按照公式(2)计算蔗糖转化酶酶值；

式(2)中：5表示酶反应体系，单位为mL；2表示取2mL酶液参与反应；50表示酶液总体积，单位为mL；X表示蜂蜜样品质量，单位为g；1表示反应时间1h；

所述试样中还原糖量的计算方法按照式(1)计算；

式(1)中：Y表示反应液的体积，单位为mL；

所述蔗糖转化酶酶值为在40℃、pH 6.0缓冲溶液实验条件下，1g蜂蜜中所含有的蔗糖转化酶1h能使蔗糖水解释放还原糖的毫克数。

2.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，步骤1)中所述超滤时，离心转速为2500～6000g，离心的时间为10～60min，离心的温度为4℃。

3.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，步骤1)中pH值4.0～6.8的缓冲液包括0.1mol/L醋酸盐缓冲液；

所述醋酸盐缓冲液的pH值为6。

4.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，步骤2)中所述灭活液为NaOH溶液；所述NaOH溶液的摩尔浓度为1mol/L。

5.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，步骤2)中所述反应的温度为40℃，所述反应的时间为1.0h。

6.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，步骤2)中所述蔗糖溶液的质量浓度为5.0％。

7.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，步骤3)中所述显色剂溶液的配制方法如下：

将6.9g结晶酚用15.2mL浓度为100g/L的NaOH溶液溶解，用水稀释至69mL，再加入6.9g亚硫酸氢钠溶解，得到溶液A；

将25g酒石酸钾钠用300mL浓度为100g/L的NaOH溶液溶解，再加入880mL浓度为10g/L的3,5-二硝基水杨酸溶液，得到溶液B；

将所述溶液A和溶液B混合，得到显色剂溶液；

所述溶液A和溶液B制备顺序没有限制。

8.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，步骤3)中所述显色剂溶液的添加体积为1.5mL。

9.根据权利要求1～8任意一项所述检测方法，其特征在于，所述蜂蜜包括蜂蜜原蜜或商品蜂蜜。