[发明专利]一个草菇乙烯受体蛋白

说明书

本申请属于草菇基因组技术领域，具体涉及一个草菇乙烯受体蛋白。该蛋白命名为VvEBD，其碱基序列全长2211 bp，如SEQ ID NO.1所示。该乙烯受体蛋白与乙烯进行结合，从而调控植物的成熟过程。发明人通过克隆获得该蛋白编码基因，并利用真核酵母表达体系对该基因进行了转化，对该蛋白与乙烯结合能力进行了实验验证。结果证明了转化有该受体蛋白跨膜域的酵母菌细胞可结合乙烯，也即，该蛋白确为草菇中乙烯受体。而基于这一发现和证明，通过超表达或者沉默该蛋白的编码基因，可为草菇新品种培育、以及草菇保鲜奠定一定技术基础。

技术领域

本申请属于草菇基因组技术领域，具体涉及一个草菇乙烯受体蛋白。

背景技术

草菇(Volvariella volvacea) 是一种我国普遍栽培的食用菌，有着悠久的栽培历史，其肉肥质嫩、味道鲜美、营养丰富，深受人们喜爱。对于草菇生长过程的研究发现，草菇能够像高等植物一样合成乙烯，且乙烯能加快其采后子实体的成熟衰老。而应用植物乙烯抑制剂1-甲基环丙烯则可抑制草菇采后子实体的成熟衰老，有效延长保鲜期。基于这一生理现象，推测草菇中可能存在与高等植物类似的乙烯受体，而通过对相关乙烯受体的深入研究，可为草菇新品种培育、草菇保鲜等应用奠定一定技术基础。

发明内容

本申请目的在于提供一个草菇乙烯受体蛋白，从而为草菇新品种培育、草菇保鲜等技术发展奠定一定技术基础。

本申请所采取的技术方案详述如下。

一个草菇乙烯受体蛋白，将其命名为VvEBD，其碱基序列全长2211 bp，如SEQ IDNO.1所示，该蛋白在草菇中作为乙烯受体发挥作用。

所述草菇乙烯受体蛋白VvEBD的制备方法，通过PCR扩增方法获得，具体PCR扩增步骤如下：

（1）提取草菇总RNA，并反转录为cDNA备用；

（2）设计PCR扩增用引物序列如下：

VvEBD-F，5’-ACAAGCTTATGTCCCCTACAGTTGCTCGCT-3’，

VvEBD-R，5’-CACCAGTGTAACGCAGCGTAGAG-3’；

以步骤（1）中反转录后的cDNA为模板，利用上述VvEBD-F/R为引物对，进行PCR扩增以获得目的基因VvEBD。

所述草菇乙烯受体蛋白VvEBD在植物中应用，该乙烯受体蛋白与乙烯进行结合，从而调控植物的成熟过程。

一种培育植物新品种的方法，利用基因工程技术手段，通过将草菇乙烯受体蛋白VvEBD转录到植物基因组中，通过与乙烯结合来调控植物生长或成熟时机。

在对现有草菇基因组研究后，发明人发现其中1个基因编码的蛋白，具有与高等植物乙烯受体的类似结构域，因此进一步推测该蛋白可能是草菇中乙烯受体。为验证这一假设，发明人进一步克隆获得了该蛋白，得到了该基因的CDS区，并利用真核酵母表达体系对该基因进行了转化，对该蛋白与乙烯结合能力进行了实验验证。结果证明了转化有该受体蛋白跨膜域的酵母菌细胞可结合乙烯，也即，该蛋白确为草菇中乙烯受体。而基于这一发现和证明，通过超表达或者沉默该蛋白的编码基因，可为草菇新品种培育、以及草菇保鲜奠定一定技术基础。

附图说明

图1 基因序列功能分析比对结果；

图2 草菇菌丝总RNA总RNA提取电泳图；

图3酵母表达重组质粒的构建；图中M：maker Trans 5；1：PCR产物EGFP；2：PCR产物VvEBD；3：融合PCR产物VvEBD/EGFP；4：pYES2/NT/A质粒；5：pYES2/NT/A-vvEBD/EGFP质粒；6：pYES2/NT/A-vvEBD/EGFP双酶切；