[发明专利]一种酶法检测支链氨基酸含量的方法及其应用在审
| 申请号： | 201911052984.7 | 申请日： | 2019-10-31 |
| 公开（公告）号： | CN110760562A | 公开（公告）日： | 2020-02-07 |
| 发明（设计）人： | 金维荣;邓伟伟;董辉;花强;朱虹 | 申请（专利权）人： | 申友基因组研究院(南京)有限公司;上海强灏生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/32 | 分类号： | C12Q1/32;G01N21/31 |
| 代理公司： | 32206 南京众联专利代理有限公司 | 代理人： | 朱欣欣 |
| 地址： | 210047 江苏省南京市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 支链氨基酸 亮氨酸脱氢酶 表征体系 快速测定 酶法检测 异亮氨酸 灵敏度 亮氨酸 缬氨酸 检测 应用 | ||
本发明涉及一种酶法检测支链氨基酸含量的方法及其应用，利用一种亮氨酸脱氢酶Leucine Dehydrogenase，以NADH含量的增加来快速正确表征体系中支链氨基酸的含量，能够通过一次反应快速测定样品中三种支链氨基酸，即亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸的总含量。本发明灵敏度高，检测迅速稳定，重复性好，操作简便，成本较低，适用范围较广。
技术领域
本发明涉及酶法检测技术领域，具体说是一种酶法检测支链氨基酸含量的方法及其应用。
背景技术
在18种人体所需的氨基酸中，亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸的分子中都含有分支侧链，因此被统称为支链氨基酸。目前检测支链氨基酸的方法主要有液相色谱法、离子色谱法、分光光度法等。液相色谱法和离子色谱法分析灵敏度高，分离效果好，适合复杂样品的分析测定，但是液相色谱测定支链氨基酸的方法中需要对样品进行复杂的前处理或者柱前衍生处理，且两者仪器费用昂贵，耗时成本高，不适用于高通量样品的分析测定。
本发明通过酶活的比较筛选，使用一种来源于
发明内容
本发明针对现有技术中存在的不足，提供了一种酶法检测支链氨基酸含量的方法及其应用，以解决现有技术中存在的问题。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种酶法检测支链氨基酸含量的方法，利用一种亮氨酸脱氢酶LeucineDehydrogenase，实现支链氨基酸含量的测定；
其中亮氨酸脱氢酶Leucine Dehydrogenase的核苷酸序列为：
ATGGAAATCTTCAAGTATATGGAAAAGTATGATTATGAACAATTGGTATTTTGCCAAGACGAAGCATCTGGGTTAAAAGCGATTATCGCTATCCATGACACAACACTTGGACCAGCATTAGGTGGTGCTCGTATGTGGACCTACGCGACAGAAGAAAATGCGATTGAGGATGCATTAAGATTAGCACGCGGGATGACATATAAAAATGCAGCTGCTGGTTTAAACCTTGGCGGTGGAAAAACGGTCATTATTGGGGACCCATTTAAAGATAAAAACGAAGAAATGTTCCGTGCTTTAGGTCGTTTCATTCAAGGATTAAACGGTCGCTATATTACCGCTGAAGATGTTGGTACAACCGTAACAGATATGGATTTAATCCATGAGGAAACAAATTACGTTACAGGTATATCGCCAGCGTTTGGTTCATCGGGTAATCCTTCACCAGTAACTGCTTATGGCGTTTATCGTGGCATGAAAGCAGCGGCGAAAGAAGCATTTGGTACGGATATGCTAGAAGGTCGTACTATATCGGTACAAGGGCTAGGAAACGTAGCTTACAAGCTTTGCGAGTATTTACATAATGAAGGTGCAAAACTTGTAGTAACAGATATTAACCAAGCGGCTATTGATCGTGTTGTCAATGATTTTGGCGCTACAGCAGTTGCACCTGATGAAATCTATTCACAAGAAGTCGATATTTTCTCACCGTGTGCACTTGGCGCAATTTTAAATGACGAAACGATTCCGCAATTAAAAGCAAAAGTTATTGCTGGTTCTGCTAATAACCAACTACAAGATTCACGACATGGAGATTATTTACACGAGCTAGGCATTGTTTATGCACCTGACTATGTCATTAATGCAGGTGGTGTAATAAATGTCGCGGACGAATTATATGGCTATAATCGTGAACGAGCGTTGAAACGTGTAGATGGTATTTACGATAGTATTGAAAAAATCTTTGAAATTTCCAAACGTGATAGTATTCCAACATATGTTGCGGCAAATCGTTTGGCAGAAGAACGTATTGCTCGTGTAGCGAAATCGCGTAGTCAGTTCTTAAAAAATGAAAAAAATATTTTGAACGGCCGTTAA；
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