[发明专利]鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒三重PCR检测引物组、试剂盒及方法在审
| 申请号： | 201911056216.9 | 申请日： | 2019-10-31 |
| 公开（公告）号： | CN110777219A | 公开（公告）日： | 2020-02-11 |
| 发明（设计）人： | 谢芝勋;李丹;李孟;谢丽基;罗思思;张艳芳;张民秀;黄娇玲;范晴;王盛;谢志勤;邓显文;曾婷婷 | 申请（专利权）人： | 广西壮族自治区兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 11279 北京中誉威圣知识产权代理有限公司 | 代理人： | 李秋琦 |
| 地址： | 530001 广西*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 细小病毒 引物 引物组合 退火 特异性引物 混合感染 基层单位 技术支撑 检测引物 扩增效果 特异性强 三重PCR 一次PCR 灵敏度 试剂盒 检测 扩增 筛选 感染 监测 试验 应用 优化 | ||
1.一种鸡细小病毒和H9亚型禽流感病毒的三重PCR检测引物组，包括引物M-F、引物M-R、引物H9-F、引物H9-R、引物ChPV-F和引物ChPV-R；
引物M-F的序列如SEQ.ID.NO.1所示，引物M-R的序列如SEQ.ID.NO.2所示，引物H9-F的序列如SEQ.ID.NO.3所示，引物H9-R的序列如SEQ.ID.NO.4所示，引物ChPV-F的序列如SEQ.ID.NO.5所示，引物ChPV-R的序列如SEQ.ID.NO.6所示。
2.含有权利要求1所述的引物组的试剂或试剂盒。
3.使用三重PCR检测鸡细小病毒和H9亚型禽流感病毒的方法，其特征在于，三重PCR所用的引物为权利要求1所述的引物组。
4.按照权利要求3所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取待测样品的cDNA和DNA；
(2)建立三重PCR反应体系，利用上述引物组进行三重PCR反应；
(3)将PCR反应产物通过琼脂糖凝胶电泳检测，当样品扩增出551bp的条带时说明该样品有鸡细小病毒，当样品扩增出378bp和249bp两条带时说明该样品有H9亚型禽流感病毒，当样品只扩增出249bp条带而没有378bp条带时，说明该样品有其他亚型禽流感病毒。
5.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(2)中PCR反应体系为：2×PCR Mix12.5μL，待测样品的cDNA和DNA混合模板2μL，引物H9-F和H9-R(25pmol/μL)各加入0.5μL，引物ChPV-F和ChPV-R(25pmol/μL)各加入0.8μL，引物M-F和M-R(25pmol/μL)各加入0.8μL，最后用超纯水补足至25μL。
6.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤(2)中三重PCR反应条件为：95℃5min；进入95℃30s，56℃45s，72℃45s，共35个循环；然后再72℃延伸10min。
7.权利要求1所述的引物组或含有该引物组的试剂盒在检测检测鸡细小病毒与H9亚型禽流感病毒中的应用。
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