[发明专利]一种钙卫蛋白异二聚体检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种钙卫蛋白异二聚体检测试剂盒及其应用，所述试剂盒包括包被抗体，所述包被抗体包括抗髓样相关蛋白8/14抗体。本发明的试剂盒采用抗髓样相关蛋白8/14抗体作为包被抗体，对样本中微量的钙卫蛋白异二聚体实现了富集作用，后续再采用钙卫蛋白单克隆抗体抗体作为检测抗体进行钙卫蛋白的检测，基本排除了其他类型钙卫蛋白抗原对结果的干扰，提高了检测灵敏度和结果准确性。

技术领域

本发明属于医学检验技术领域，涉及一种钙卫蛋白异二聚体检测试剂盒及其应用。

背景技术

钙卫蛋白(也称钙防蛋白)是一种来源于中性粒细胞和巨噬细胞的异二聚体蛋白，具有调节免疫、诱导细胞凋亡、抑制细菌生长等功能，最近，钙卫蛋白与溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)、炎性肠病(inflammatory bowel disease，IBD)和肿瘤关系的研究也逐渐成为热点。研究发现，钙卫蛋白在溃疡性结肠炎、炎性肠病和肿瘤患者的体液和排泄物中的含量有所变化，可以作为肿瘤标志物用于肿瘤的早期诊断。

钙卫蛋白(calprotectin)由2条重链MRP14和1条轻链MRP8非共价结合形成异二聚体，在不同的分化阶段存在不同的形式，在中性粒细胞和单核细胞的细胞质内表达MRP8和MRP14单体。在循环的单核细胞向巨噬细胞随机转化的过程中，MRP8和MRP14表达量呈下调趋势。在早期炎症浸润阶段，活化的中性粒细胞和单核细胞的细胞膜和细胞质中出现MRP8和MRP14的杂聚体MRP8/14，即钙卫蛋白。钙卫蛋白是一种重要的炎症反应性蛋白，在粪便中稳定存在。研究表明，钙卫蛋白的含量变化能动态反映溃疡性结肠炎的活动性。UC是一种慢性非特异性结肠炎症，患病原因尚不明确，病程漫长，病情轻重不一，常反复发作，在我国的诊断率不断增加。因此，维持治疗和预防复发成为治疗的关键。

CN108333368A公开了一种检测人粪便中钙卫蛋白的试剂盒及制备方法，所述试剂盒包括盒体本身和位于试剂盒中的检测试纸条；所述检测试纸条包括底板以及依次设置在底板上的样品垫、结合垫1、结合垫2、反应膜和吸水纸；所述结合垫1包被有第一抗钙卫蛋白抗体-荧光微球偶联物和生物素标记的第二抗钙卫蛋白抗体；所述结合垫2包被有亲和素；所述反应膜上按层析方向依次设置检测T线和质控C线，所述反应膜上T线位置所述检测T线包被生物素-牛血清白蛋白偶联物或生物素-鸡卵清白蛋白偶联物，所述质控C线上包被羊抗鼠IgG抗体；所述第一抗钙卫蛋白抗体荧光微球偶联物由如下方法制备得到：将活化的荧光微球与第一抗钙卫蛋白抗体偶联，然后用封闭剂封闭，获得所述第一抗钙卫蛋白抗体荧光微球偶联物，所述封闭剂为包含1～3wt％明胶、2～4wt％NH₂-PEG和0.5～1wt％海藻糖的25～50mM MES缓冲液。但是所述试剂盒不能用于钙卫蛋白的定量或半定量检测。

因此，提供一种钙卫蛋白的检测方法及相关试剂盒，以实现快速、准确、灵敏诊断钙卫蛋白的目的，具有巨大的应用价值和市场前景。

发明内容

针对现有技术的不足及实际需求，本发明提供了一种钙卫蛋白异二聚体检测试剂盒及其应用，所述试剂盒采用抗髓样相关蛋白8/14抗体作为包被抗体，实现了对钙卫蛋白异二聚体的特异性检测，检测灵敏度高，操作简单快速。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种检测钙卫蛋白异二聚体的试剂盒，所述试剂盒包括包被抗体，所述包被抗体包括抗髓样相关蛋白8/14抗体。

本发明中，采用抗髓样相关蛋白8/14抗体(抗MRP8/MRP14抗体)作为包被抗体，对样本中微量的钙卫蛋白异二聚体实现了富集作用，后续再采用钙卫蛋白单克隆抗体抗体作为检测抗体进行钙卫蛋白的检测，基本排除了其他类型钙卫蛋白抗原对结果的干扰，准确度更高，避免了假阴性结果。