[发明专利]甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒，其特征在于，包括：

校准品；

质控品；

抗人IgM单克隆抗体包被的磁微粒混悬液；

化学发光标记物标记的HAV抗体；

游离HAV抗原。

2.根据权利要求1所述的甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒，其特征在于，所述抗人IgM单克隆抗体包被的磁微粒混悬液中，磁微粒浓度为0.05～0.2％，磁微粒粒径为1～3μm。

3.根据权利要求1所述的甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒，其特征在于，所述抗人IgM单克隆抗体包被的磁微粒混悬液中，抗人IgM单克隆抗体与磁微粒包被质量比例为1:500～1:50。

4.根据权利要求1所述的甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物标记的HAV抗体浓度为0.1～2μg/mL。

5.根据权利要求1所述的甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物标记的HAV抗体中，化学发光标记物与HAV抗体的摩尔比为1:1～10:1。

6.根据权利要求1所述的甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物为吖啶酯或吖啶酯衍生物。

7.根据权利要求1所述的甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒，其特征在于，所述游离HAV抗原浓度为0.01～0.5μg/mL。

8.制备权利要求1至7中任意一项所述的甲型肝炎病毒抗体IgM检测试剂盒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、制备抗人IgM单克隆抗体包被的磁微粒混悬液；

步骤二、制备化学发光标记物标记的HAV抗体；

步骤三、制备游离HAV抗原；

步骤四、制备校准品、质控品。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤一的具体过程如下：

(1)洗涤

取浓度为5％的磁颗粒溶液0.3mL，加入0.9mL包被缓冲液稀释磁颗粒浓度至0.5％，混匀后，放置于磁分离器上，直至上清无浑浊，弃上清，留取磁颗粒，在磁颗粒中加入1mL包被缓冲液将磁珠悬起，按上述方法再进行分离并重悬；

(2)活化

采用20mM、pH 6.5的磷酸缓冲液为活化缓冲液，10mg/mL EDC为活化剂，活化温度为25℃，活化时间为60min；

(3)包被

采用pH 7.0的磷酸缓冲液为包被缓冲液，包被温度为25℃，包被时间为12h；

(4)封闭

采用pH 8.0、10％BSA缓冲液为封闭缓冲液，封闭温度为25℃，封闭时间为2h，得到R1试剂。

10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤二的具体过程如下：

(1)取0.5mg HAV抗体，用30KDa孔径超滤离心管进行超滤离心，将原材料缓冲液置换为标记缓冲液，9000rpm离心30min；所述原材料缓冲液为20mM、pH 7.4的PB和0.01％SDS；所述标记缓冲液为100mmol/L PB和150mmol/L NaCl，pH6.0；

(2)按照化学发光标记物与HAV抗体的摩尔比为1:1～10:1的比例加入化学发光标记物原液，混匀，37℃，标记4h；

(3)标记反应结束后，加入封闭缓冲液，封闭时间为1h；所述封闭缓冲液为100mmol/LPB、150mmol/L NaCl和10％赖氨酸，pH6.0；

(4)封闭后用30KDa孔径超滤离心管进行超滤离心，除去未偶联的分子。超滤结束后，测定蛋白浓度，作为中间品保存，用于试剂配制；

(5)取中间品和试剂缓冲液，配制成抗体浓度为0.5μg/mL的R2试剂，所述试剂缓冲液为100mmol/L PB和150mmol/L NaCl，pH6.0。