[发明专利]一种水产品中脱氢胆酸的检测方法

说明书

本发明涉及一种水产品中添加剂的检测方法，具体是涉及一种水产品中脱氢胆酸的检测方法，配制标准溶液，乙酸铵缓冲盐溶液浸泡水产品样品，加入β‑葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶酶解过夜，乙酸乙酯提取目标物，氮吹浓缩至干后甲醇定容，以液相色谱‑三重四极杆质谱联用仪检测，采用外标法定量，所得标准曲线的相关系数R²＞0.999，脱氢胆酸在1、2、5、10和50ng/mL浓度范围内具有良好的线性关系，对脱氢胆酸的仪器检测限为0.117μg/kg，本方法具有快速简便，灵敏准确，环保廉价的特点，对水产品中脱氢胆酸残留检测具有实际应用、指导意义，回收率、重复性、灵敏度和检测限均满足水产品出口韩国的检测限要求。

技术领域

本发明涉及一种水产品中添加剂的检测方法，具体是涉及一种水产品中脱氢胆酸的检测方法。

背景技术

脱氢胆酸是一种胆汁酸，胆汁酸是动物体内胆固醇代谢过程中所产生的一系列固醇类物质，因为主要经由胆囊和胆汁一起排汇到肠道中，并具有酸性，因此统称为胆汁酸。不同动物的胆汁酸种类和数量都不相同。胆汁酸具有表面活性作用，因为它的分子结构有两性，一端为烷基，具有亲酯性，可以和油脂类结合，另一端为羟基和羧基，具有亲水性。因此，在动物体内胆汁酸最重要的功能是消化食物中的脂肪和脂溶性物质(脂溶性维生素和胆固醇等)。其次，胆汁酸具有提高动物免疫力，减少动物体内细菌内毒素吸收量的功能。胆汁酸还是一种有效的杀菌剂，通过抑制大肠杆菌，能够预防气胀与腹肿胀等疾病。脱氢胆酸还可促进肝细胞分泌大量稀薄的胆汁，增加胆汁容量，使胆道畅通，消除胆汁淤滞，起到利胆作用。对脂肪的消化和吸收也有一定的促进作用。综上所述，饲料中添加胆汁酸可以促进水产品健康养殖，提高经济效益，但同时，过量的胆汁酸会在水产品体内蓄积、残留，而人类食用含有胆汁酸，如脱氢胆酸的水产品，可有嗳气、打嗝、腹泻、恶心、肌痉挛、直肠区周围皮肤刺激等不良反应，如果是长期食用或一时摄入量过多，可导致电解质失衡，甚至可出现呼吸困难、心跳骤停、心律紊乱、肌痉挛、极度疲乏无力等严重反应。

韩国食药监局对水产品中的脱氢胆酸制定了残留限量标准，规定水产品中的脱氢胆酸不得超过0.01mg/kg；并对来自中国的水产品进行了脱氢胆酸残留的检测，其中2018年1月起到2019年8月，中国共有2个批次的水产品被检出脱氢胆酸残留不合格，且均是在2019年7月、8月连续发现，造成了较大的经济损失。相反，我国在水产品中脱氢胆酸的检测尚无标准方法，国内外的检测方法也基本没有，因此急需建立一套灵敏、准确、快速的水产品中脱氢胆酸残留检测方法，为出口韩国水产品的脱氢胆酸残留检测提供技术手段。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种水产品中脱氢胆酸的检测方法，回收率、重复性、灵敏度和检测限均满足水产品出口韩国的检测限要求。

本发明的技术方案如下：

一种水产品中脱氢胆酸的检测方法，包括以下步骤，

S1、配制标准品：将脱氢胆酸标准品用甲醇溶解配制成1.0mg/mL的标准储备溶液，将所述标准储备溶液用甲醇稀释成浓度为100ng/mL标准工作溶液；

S2、标准溶液配制：分别吸取步骤S1所述的标准工作溶液10、20、50、100、500μL于2mL离心管中，甲醇定容到1.0mL，过滤，得到系列标准溶液；

S3、样品前处理：水产品样品取可食部分搅碎后，加入乙酸铵缓冲溶液和β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶，混匀，酶解；酶解后放置至室温，加入乙酸乙酯，涡旋提取，离心，移取上层有机相，再在下层水相中加入乙酸乙酯，涡旋提取，离心，合并有机相，氮吹浓缩至干，加入甲醇定容，过滤，得到滤液；

S4、检测：将步骤S2的系列标准溶液和步骤S3的滤液分别注入液相色谱-三重四极杆质谱联用仪中进行定量和/或定性分析测试。

优选的，步骤S2中所述过滤为采用平均孔径0.22μm的聚四氟乙烯(PTFE)滤膜过滤。