[发明专利]一种变叶榕组织培养与快速繁殖的方法

说明书

本发明公开了一种变叶榕组织培养与快速繁殖的方法，依次包括以下步骤：（1）变叶榕茎段的消毒和接种：取当年抽出的变叶榕新茎，剪成带腋芽茎段进行接种；（2）丛生芽的诱导；（3）不定芽的增殖；（4）再生植株的生根培养；（5）炼苗移栽。在上述步骤中采用了不同处理、不同成分及配比的培养基。采用本发明的方法，能够快速地获得变叶榕植株，利于产业化生产。采用本发明方法，变叶榕丛生芽的不定芽诱导率高达87.5%，不定芽数6.8，不定芽增殖倍数可达6.5，生根率达100%，植株移栽成活率可达99%以上。

技术领域

本发明属于植物培养技术领域，具体涉及变叶榕组织培养与快速繁殖的方法。

背景技术

变叶榕(Ficus variolosa Lindl.ex Benth.)，桑科榕属灌木或小乔木，产浙江、江西、福建、广东(及沿海岛屿)、广西、湖南、贵州、云南东南部及南部。常生于溪边林下潮湿处。其根入药称变叶榕，又名金不换。其性微温，味微苦、辛，具祛风除湿、活血止痛和催乳等作用，主治风湿痹痛、胃痛、疖肿、跌打损伤和乳汁不下等症。茎皮纤维可作人造棉、麻袋和造纸的原料。目前变叶榕基本处于野生状态，而野生状态的变叶榕呈零星状分布，说明其靠种子繁殖的效率并不高。目前尚无变叶榕快速繁殖的研究报道。

目前榕属植物的组织培养与快速繁殖的研究报道多集中于橡皮树、菩提树、富贵榕等园艺用植物和无花果等果树上，所用外植体多为茎段、茎尖和叶片，但不定芽的诱导率和增殖率普遍不高，且实验所用的基本培养基普遍使用高离子浓度的MS。桑科植物尤其是榕属植物，茎和叶中分布大量的乳汁管，乳汁管里乳汁含有大量多酚类物质，在受伤或离体培养时，很易流出在空气中氧化成褐色的醌类物质，导致培养基的褐变，从而影响了组织培养的顺利进行。而如何防止褐变在文献里基本无涉及。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种成活率高，利于实现产业化生产的变叶榕组织培养与快速繁殖的方法。

为实现本发明之目的，采用以下技术方案予以实现：

一种变叶榕组织培养与快速繁殖的方法，依次包括以下步骤：

(1)变叶榕茎段的消毒

当年生变叶榕的茎段，放入适量的洗洁精溶液浸泡2分钟，用流水冲洗0.5小时后，沥干后放入冰箱4℃低温冷藏0-48小时，取出后在超净台浸入滴加有1滴吐温-80，质量分数为0.1％的升汞溶液内浸泡消毒10-12分钟，然后用无菌水充分浸洗3次，于无菌滤纸上切去头尾并切成带一腋芽的茎段，转入过滤灭菌的1％抗坏血酸溶液中浸泡0-60分钟，用无菌水充分浸洗3次后得到消毒完的外植体材料；

(2)丛生芽的诱导

将上一步得到的外植体材料按生长极性接种到WPM基本培养基中进行培养，该培养基添加有不超过2.0毫克/升的ZT、不超过5.0毫克/升的6-BA、不超过1.0克/升的的CH、不超过5.0克/升的PVP、30克/升的蔗糖、9.0克/升的琼脂，pH值为5.8-6.0，接好外植体的培养基置先于黑暗中培养1天，培养温度为21-25℃；随后转入光照培养，培养条件为：培养温度为21-25℃，光照时间为14小时/天，光照强度30-40微摩尔/米²·秒；

(3)不定芽的增殖

将上一步诱导获得的不定芽丛切成2-3个不定芽的芽块，接种到WPM培养基中进行培养，该培养基添加有不超过5.0毫克/升的6-BA、不超过1.0毫克/升的CH、不超过5.0克/升的 PVP、30克/升的蔗糖、9.0克/升的琼脂，pH值为5.8-6.0，培养条件为：培养温度为21-25℃，光照时间为14小时/天，光照强度30-40微摩尔/米²·秒；

(4)再生植株的生根培养