[发明专利]HpaBC基因、突变体及其应用有效
| 申请号： | 201911058209.2 | 申请日： | 2019-11-01 |
| 公开（公告）号： | CN110938606B | 公开（公告）日： | 2023-01-17 |
| 发明（设计）人： | 陈伟;姚骏;唐双焱 | 申请（专利权）人： | 中国科学院微生物研究所 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12P7/22;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京律和信知识产权代理事务所(普通合伙) 11446 | 代理人： | 姚志远;冷文燕 |
| 地址： | 100101 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | hpabc 基因 突变体 及其 应用 | ||
1.一种HpaBC-MUT3基因，它的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，其氨基酸序列如SEQ IDNO.14所示。
2.一种重组载体，它含有权利要求1所述的HpaBC-MUT3基因。
3.一种使用如权利要求2所述的重组载体制备羟基酪醇的方法，其特征在于，包括：
制备大肠杆菌BL21(DE3)pETDuet-1-T7-TyrB-Aro10-T7-HpaBC，所述HpaBC的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示和氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；和
将序列表SEQ ID NO.5所示的DNA分子插入pET28a载体的NdeI和XhoI双酶切位点间得到的pETDuet-1-T7-TyrB-Aro10-T7-HpaBCMUT3：再将pETDuet-1-T7-TyrB-Aro10-T7-HpaBCMUT3导入BL21(DE3)的感受态细胞中得到大肠杆菌BL21(DE3)pETDuet-1-T7-TyrB-Aro10-T7-HpaBCMUT3；
然后，将大肠杆菌BL21(DE3)pETDuet-1-T7-TyrB-Aro10-T7-HpaBC和BL21(DE3)pETDuet-1-T7-TyrB-Aro10-T7-HpaBCMUT3的单菌落分别接种至含有终浓度为50μg/ml的卡那霉素的LB液体培养基中，37℃培养12h，收集发酵液；
将大肠杆菌BL21(DE3)pETDuet-1-T7-TyrB-Aro10-T7-HpaBC和BL21(DE3)pETDuet-1-T7-TyrB-Aro10-T7-HpaBCMUT3的发酵液按照1％体积百分含量的接种量转接至100ml新鲜的LB液体培养基中，37℃培养至OD600达到0.6，分别得大肠杆菌BL21(DE3)pETDuet-1-T7-TyrB-Aro10-T7-HpaBC和BL21(DE3)pETDuet-1-T7-TyrB-Aro10-T7-HpaBCMUT3发酵后的LB液体培养基；
在两种发酵后的LB液体培养基中分别加入无菌的IPTG，使IPTG在培养基中的终浓度为0.4mM，在30℃进行诱导发酵；同时加入无菌的酪氨酸溶液至终浓度为10mM，16h后结束发酵。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述制备大肠杆菌BL21(DE3)pETDuet-1-T7-TyrB-Aro10-T7-HpaBC的方法，包括：
将质粒pETDuet-1-T7-TyrB-Aro10-T7-HpaBC转入BL21(DE3)的感受态细胞中，
得到重组大肠杆菌BL21(DE3)pETDuet-1-T7-TyrB-Aro10-T7-HpaBC。
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