[发明专利]一种鸡α-干扰素的后提取工艺

说明书

本发明涉及一种鸡α‑干扰素的后提取工艺，属于禽畜药物生产技术领域。该工艺包括：S1.将含有鸡α‑干扰素的发酵液离心，保留上清液；S2.将上清液通过50KDa陶瓷膜过滤，再将滤出液通过10KDa陶瓷膜过滤，收集截留液；S3.向步骤S2的截留液中加入等体积的Cu²⁺‑IDA‑葡聚糖载体和NaCl溶液，进行吸附反应，得到反应液；S4.向步骤S3的反应液中加入等体积的磷酸盐缓冲液，混匀后通过50KDa陶瓷膜过滤，收集截留液；S5.向步骤S4的截留液中加入洗脱液，然后通过30KDa陶瓷膜过滤，收集滤出液；S6.将步骤S5的滤出液通过10KDa陶瓷膜过滤脱盐，收集截留液，即得鸡α‑干扰素，得率为61％以上，纯度为98％以上，活性收率为96.73％以上。

技术领域

本发明涉及一种鸡α-干扰素的后提取工艺，属于禽畜药物生产技术领域。

背景技术

我国是世界养鸡大国，2018年出栏超39亿只，每年因病毒感染而造成的损失无法估量，急需寻求一种高效、安全以及无毒副作用的鸡病毒性疾病防治新产品。目前利用大肠杆菌和毕赤酵母成功地表达出重组干扰素，但是至今在我国未有重组的鸡干扰素获得新兽药证书，也未有进口的重组鸡干扰素获得进口注册证书。其中很大的障碍就是生产工艺复杂，尤其是后提取工艺。

后提取工艺的目的是为了获得纯度较高的干扰素，目前常用的方法分为两步，一是初步纯化，例如盐析、等电点、有机溶剂沉淀等；二是精度纯化常用的有液相色谱法、金属亲和层析、离子交换、疏水层析和凝胶过滤层析以及反相作用色谱法，要想获得理想的结果，通常需要将几个方法组合优化，最终导致提取分离纯化工艺复杂，技术繁多，收率低，成本高。目前还没有理想的后提取工艺用于获得高纯度的重组鸡α-干扰素。

发明内容

为弥补上述领域存在的不足，本发明以毕赤酵母为生产菌株，通过对发酵液进行离心、膜分离的初步纯化以及亲和-膜过滤的精度纯化，喷雾干燥，制得鸡α-干扰素干粉。两步法纯化后的鸡α-干扰素纯度达98.6％，蛋白得率为63.41％，鸡α-干扰素干粉活性收率为96.73％。

本发明提供一种鸡α-干扰素的后提取工艺，其特征在于，包括步骤：

S1.将含有鸡α-干扰素的发酵液离心，弃菌体，保留上清液；

S2.将上清液先通过50KDa分子量陶瓷膜过滤，收集滤出液；再将所述滤出液通过10KDa分子量陶瓷膜过滤，收集截留液；

S3.向步骤S2的截留液中加入等体积的Cu²⁺-IDA-葡聚糖载体和NaCl溶液，进行吸附反应，得到反应液；

S4.向步骤S3的反应液中加入等体积的磷酸盐缓冲液，混匀后通过50KDa分子量陶瓷膜过滤，收集截留液；

S5.向步骤S4的截留液中加入洗脱液，对鸡α-干扰素进行洗脱，然后通过30KDa分子量陶瓷膜过滤，收集滤出液；

S6.将步骤S5的滤出液通过10KDa分子量陶瓷膜过滤脱盐，收集截留液，即得鸡α-干扰素原液。

在一些实施例中，所述步骤S2中，所述通过50KDa分子量陶瓷膜过滤的过滤压力为：进口压力0.5MPa，出口压力0.2MPa，上清液流速为1m³/h；所述通过10KDa分子量陶瓷膜过滤的过滤压力为：进口压力0.5MPa，出口压力0.25MPa，滤出液流速为1.2m³/h。

在优选实施例中，所述步骤S3中，加入等体积的4mg/mL Cu²⁺-IDA-葡聚糖载体，加入NaCl溶液使反应体系中NaCl的终浓度为0.9mol/L，调节pH值为8.0，30℃恒温水浴，以500rpm/min的速度搅拌反应30min，得到反应液。