[发明专利]中华乌塘鳢卵黄蛋白原重组表达及纯化方法

说明书

中华乌塘鳢卵黄蛋白原重组表达及纯化方法，涉及融合蛋白表达纯化方法技术领域，提供一种基于中华乌塘鳢卵黄蛋白原基因，克隆其部分基因并体外重组质粒，转入大肠杆菌进行原核表达，IPTG诱导温度为16℃条件下获得高效融合表达，并且表达目的蛋白以可溶性状态存在，目的蛋白占细菌可溶性蛋白总量25％以上。应用纯化技术获得融合蛋白MNP‑VTG，通过蔗糖酶酶切将标签MNP从融合蛋白中分离获得目的蛋白VTG单体。该方法表达高效纯化VTG简便，因是可溶性，分离比包涵体简单，无需复性。获得的重组VTG为后续应用提供了稳定均一的原料基础。给重组蛋白可以用于生物活性功能研究，亦可以制备相应抗体开展检测研究。

技术领域

本发明涉及融合蛋白表达纯化方法技术领域，尤其是涉及中华乌塘鳢卵黄蛋白原融合蛋白表达及纯化方法。

背景技术

卵黄蛋白原VTG是卵生动物卵发育中卵黄蛋白的前体，由肝脏细胞在雌激素诱导下基因进行表达，产生的蛋白提供血淋巴系统输入卵巢，进入卵子成熟为卵黄蛋白。为卵子的发育提供营养。作为一种生殖营养蛋白，VTG一般在卵黄发育期受到激素的诱导(1.Bownes M.The roles of juvenile hormone,ecdysone and the ovary in thecontrol of Drosophila vitellogenesis[J].JInsect Physiol,1989,35：409-413；2.C.M.Campbell DRI.Hormonal control of vitellogenesis inhypophysectomizedwinter flounder(Pseudopleuronectes americanusWalbaum)[J].Gen Comp Endocrinol,1976,28：143-150；3.Tufail M,Nagaba Y,Elgendy AM,et al.Regulation ofvitellogenin genes in insects[J].Entomological Science,2014,17(3)：269-282)，在昆虫雌性成虫的脂肪体、鱼类的肝脏或者其他的动物的特定组织中特异性地大量表达，并通过定位于卵巢的VTG受体(Vgreceptor，VgR)所介导的内吞作用入卵(4.Tufail M,TakedaM.Molecular characteristics of insect vitellogenins[J].J Insect Physiol,2008；54(12)：1447-1458；5.Sappington TW,Raikhel AS.Molecular characteristics ofinsect vitellogenins and vitellogeninreceptors[J].Insect Biochemistry andMolecular Biology,1998,28：277-300；6.Tufail M,Takeda M.Insect vitellogenin/lipophorin receptors：molecular structures,role in oogenesis,and regulatorymechanisms[J].J Insect Physiol,2009,55(2)：87-103；7.Bai H,Qiao H,etal.Molecular characterization and developmental expression of vitellogenin inthe oriental river prawn Macrobrachium nipponense and the effects of RNAinterference and eyestalk ablation on ovarian maturation[J].Gene,2015,562(1)：22-31)。VTG准确的时空特异性表达决定了卵的正常发育(8.Veerana M,Kubera A,Ngernsiri L.Analysis of the vitellogenin gene of rice moth,Corcyracephalonica stainton[J].Archives ofInsect Biochemistry and hysiology,2014,87(3)：126-147)。