[发明专利]一种利用离体杨树细小雌花枝人工杂交获得杂种苗的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，尤其是植物组织培养技术领域，公开了利用离体杨树细小雌花枝人工杂交获得杂种苗的方法，以及一种利用离体杨树细小雌花枝人工杂交获得杂种苗的培养基及其在利用离体杨树细小雌花枝人工杂交获得杂种苗中的应用。采用本发明的方法能够获得大量有活力的杨树杂交种子，继而获得大量健壮的杨树杂种无菌苗。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是植物组织培养技术领域，具体涉及一种利用离体杨树细小雌花枝人工杂交获得杂种苗的方法。

背景技术

杨树属于杨柳科(Salicacae)杨属(Populus L.)植物，是重要的造林绿化树种和工业用材树种。目前，人工杂交育种是获得杨树优良品种的主要育种途径。

杨树人工杂交一般采用以下三种方式：一是在自然界生长的雌树上进行；二是把拟作为母本的花枝嫁接在预先栽在温室花盆中的砧木上，在开花时做杂交；三是把作为母本的花枝从树上剪下，在室内水培。室内水培方式不仅操作方法简单，而且可避免到高大的树梢上进行授粉杂交的困难。然而，室内水培的花枝开花结实直到果实成熟大概需要40-60天，在此期间所消耗的绝大部分是枝条内储存的养分，这就要求所采集的花枝需要至少2年生以上的粗壮枝条，直径要求1.5-2.0cm以上，从而保证在果实发育过程中能够提供充足的养分。而进入盛花期的杨树上多数为直径达不到1.0cm的较细的花枝，这种达不到要求的花枝，在进行室内切枝水培杂交中期，就会出现果实失水干缩、果穗脱落等现象，难以获得杂种苗。到目前为止，尚无利用直径小于1.0cm的杨树花枝进行室内水培、人工杂交，并能够获得大量杂种苗的报道，因此亟待开发一种采用离体杨树细小雌花枝进行人工杂交授粉，获得大量杂种苗的方法。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的上述缺陷，为了解决杨树人工杂交育种中细小雌花枝无法进行室内水培杂交获得杂种苗的问题，提供了一种利用离体杨树细小雌花枝人工杂交获得杂种苗的方法，利用该方法能够获得大量有活力的杨树杂交种子，继而获得大量健壮的杨树杂种无菌苗。

为此，本发明一方面提供了一种利用离体杨树细小雌花枝人工杂交获得杂种苗的方法，其包括以下步骤：

1、雌花枝的水培；

2、雌花序授粉前处理；

3、人工授粉；

4、幼嫩种子培养前处理；

5、幼嫩种子离体培养：将幼嫩种子平铺于幼嫩种子培养基上，培养基为MS+25g蔗糖+2.2g植物凝胶，在16h/8h光周期、光照强度2500Lux、温度27℃/21℃的条件下培养；

6、杂种苗温室移栽；

其中杨树优选黑杨，更加优选为美洲黑杨。

在本发明进一步优选的实施方案中，所述雌花枝的水培为选取雌花枝为直径小于1.0cm的杨树越冬后枝条，水培方法为去除顶芽及全部叶芽，每个小花枝保留1-2个饱满的花芽，将花枝基部剪成斜面，插入装有清水的塑料桶中，放入温度为25℃、湿度70％、自然光照的温室，每天换水一次。

在本发明进一步优选的实施方案中，所述雌花序授粉前处理是在人工授粉前，从花序顶端剪除1/2长度的雌花序。

在本发明进一步优选的实施方案中，所述人工授粉的时间为雌花序上的雌花柱头明亮而有透明汁液时，授粉方法为用毛笔沾上杨树花粉，轻轻撒在雌花柱头上，连续授粉3天。

在本发明进一步优选的实施方案中，所述幼嫩种子培养前处理是将人工授粉后20天的果实用10％次氯酸钠表面消毒10分钟，无菌水清洗3次，用手术刀纵向切开，用解剖针挑出幼嫩种子。