[发明专利]用于堆肥过程中的固氮菌的筛选方法和应用

权利要求书

1.用于堆肥过程中的固氮菌的筛选方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

(1)测定堆肥过程中的不同阶段氮素损失率和累积氮素损失率；

(2)通过冗余分析，建立不同阶段优势微生物种群和氮素损失之间的相关关系。

2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤(1)具体为：在堆肥开始、高温期、降温期和成熟期，按照多点取样混合，样品风干后测定含氮量；按照测定的不同阶段的含氮量，计算堆肥过程中的不同阶段氮素损失率和累积氮素损失率。

3.根据权利要求1或2所述的筛选方法，其特征在于，还包括步骤(3)：根据冗余分析指示的显著负相关的优势种群，分析其中存在的潜在的和已知的固氮菌。

4.根据权利要求3所述的筛选方法，其特征在于，还包括步骤(4)：以步骤(3)得出的潜在的和已知的固氮菌为目标，按照菌株的筛选、分离和鉴定方法，筛选固氮菌株。

5.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，还包括步骤(5)：对筛选的固氮菌株进行固氮能力测定，对确有固氮能力的菌株按照微生物生理生化方法和测序相结合的方法进行菌株鉴定。

6.根据权利要求1-5任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述堆肥的原料主料是畜禽粪便。

7.根据权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，所述堆肥的原料辅料是秸秆或菇渣、锯末。

8.根据权利要求1-7任一项所述的筛选方法，其特征在于，具体步骤为：

(1)堆肥原料准备：以畜禽粪便为主料，秸秆为辅料，配制不同原料和不同碳氮比的发酵原料；

(2)堆肥过程和样品采集：按照正常的堆肥程序和管理进行堆肥，分别在堆肥开始、高温期、降温期和成熟期，按照多点取样混合，样品分为两份，一份风干用于测定含氮量，另一份样品于-80℃冷藏用于微生物多样性测序；

(3)分析：按照测定的不同阶段的含氮量，计算堆肥过程中的阶段氮素损失量和累积氮素损失率；通过冗余分析，建立不同阶段优势微生物种群和阶段氮素损失量之间的相关关系，根据冗余分析指示的显著相关的优势种群，分析其中存在的潜在的和已知的固氮菌；

(4)固氮菌筛选：以分析得出的潜在的和已知的固氮菌为目标，按照菌株的筛选、分离和鉴定方法，筛选固氮菌株；

(5)固氮菌鉴定：对筛选的固氮菌株进行固氮能力测定，对确有固氮能力的菌株按照微生物生理生化方法和测序相结合的方法进行菌株鉴定。

9.权利要求1-8任一项所述的筛选方法在堆肥优势微生物种群筛选中的应用。