[发明专利]一种石斑鱼的繁殖方法

说明书

本发明公开了一种石斑鱼的繁殖方法，分别从采集石斑鱼的精液和雌石斑鱼的卵细胞；将精液和卵细胞混合，并轻轻搅拌，获得受精卵；将受精卵置于砂滤海水中静置，随后用砂滤海水冲洗受精卵，洗净受精卵上的精液、亲鱼排泄物和分泌物将；受精卵密度为5—10c.mL^‑1，微充气，按照1.5×10^‑5 L^‑1的剂量加入5％聚维酮碘溶液，药浴10‑15min，最后收集灭毒胚胎；将灭毒胚胎置于盐度30的消毒海水中孵化，密度0.01—0.03个/ml，微充气，孵化。感染鱼类诺达病毒受精卵在卵裂4细胞期前通过本申请的清洗、灭毒操作后，鱼类诺达病毒RNA检测均为阴性；最后通过本申请的孵化操作，可以获得没有鱼类诺达病毒的仔鱼，而且仔鱼的孵化率高，畸形率低，能有效避免鱼类诺达病毒垂直传播。

技术领域

本发明涉及动物养殖领域，具体涉及一种石斑鱼的繁殖方法。

背景技术

鱼类诺达病毒(piscine nodaviruses)(即神经坏死病病毒Viral nervousnecrosis，VNN)是感染斜带石斑鱼、褐点石斑鱼、鞍带石斑鱼、珍珠龙趸等石斑鱼类，及欧洲狼鲈、军曹鱼等海水鱼类各个生长阶段的主要病毒。研究表明，其传播途径主要为亲鱼的垂直传播、饵料生物和生活环境的水平传播，感染后死亡率90％以上，导致仔、稚、幼鱼或者成鱼批量死亡，严重抑制海水名贵鱼类养殖业的可持续发展。

在石斑鱼种苗生产中，因亲鱼鱼类诺达病毒的垂直传播导致仔、稚、幼鱼爆发病毒病而失败的现象日趋严重。近年来，粤、桂、琼三省沿海石斑鱼(珍珠龙趸)种苗培育中，从仔鱼培育至体长9cm的种苗规格，其成活率仅为0.2％—0.4％。其中神经坏死病成为制约石斑鱼养殖业可持续发展核心问题。

目前，切断鱼类诺达病毒垂直传播的方法有无特定病原(Specific pathogenFree，简称SPF)亲鱼培育及种质资源保存、受精卵消毒等，但SPF亲鱼培育的周期长(褐点石斑鱼一代亲鱼雌鱼初次性成熟的时间是4-5年，雄鱼为6-7年，斜带石斑鱼雌鱼初次性成熟的时间是4-5年，雄鱼为6-7年，鞍带石斑鱼雌鱼初次性成熟的性时间是6-8年，雄鱼为8-10年)、SPF亲鱼种群维持费用高，因此尽管其应用前景广泛，但由于超长的研发周期，且SPF种质资源具有重新感染病毒的极大风险等原因，目前尚无法应用于产业。本专利通过使用常用的消毒剂和安全的剂量在石斑鱼胚胎发育的特定时段采用精准的步骤进行消毒，切断石斑鱼亲鱼携带的鱼类诺达病毒的垂直传播，获取批量胚胎发育正常且不携带病毒的石斑鱼仔鱼。

迄今为止，未见有关于精准切断石斑鱼类亲鱼鱼类诺达病毒垂直传播的方法的报道，仅仅只有关于诺达病毒的快速检测方法。例如：ZL201610277466.5《三步法快速检测石斑鱼β诺达病毒的试剂盒及其操作方法》“快速提取RNA、预混反应试剂的方法，简化了RNA病毒的检测步骤。本发明所用材料和试剂全部为一次性使用，确保不会出现假阳性结果；本发明试剂盒组份简单，使用方法可操作性强，适用于检测和防控石斑鱼类黑身病的流行，能特异性，高灵敏度的检测出β诺达病毒。”虽然能加快检测发现诺达病毒，但是无法从根本上有效切断鱼类诺达病毒垂直传播。

发明内容

针对上述问题，本发明旨在提供一种能有效减少石斑鱼类诺达病毒垂直传播、提高种苗质量和产量的石斑鱼的繁殖方法。

为实现该技术目的，本发明的方案是：一种石斑鱼的繁殖方法，具体步骤如下：

第一步，采集，分别从采集石斑鱼的精液和雌石斑鱼的卵细胞；

第二步，人工授精，将精液和卵细胞混合，并轻轻搅拌，待搅拌均匀后加入少量海水活化精子，获得受精卵；

第三步，洗卵，将受精卵置于砂滤海水中静置，受精卵密度为1—5c.mL^-1，随后用砂滤海水冲洗受精卵，洗净受精卵上的精液、亲鱼排泄物和分泌物；