[发明专利]用于检测高毒力非粘液型肺炎克雷伯菌的试剂盒在审
| 申请号： | 201911063406.3 | 申请日： | 2019-11-04 |
| 公开（公告）号： | CN110669852A | 公开（公告）日： | 2020-01-10 |
| 发明（设计）人： | 黄维;邹全明;张敏;章金勇;胡春霞;惠真;邓秋洋;钟裕欣;柳施一;崔瑞勤 | 申请（专利权）人： | 深圳市人民医院 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/22 |
| 代理公司： | 51211 成都天嘉专利事务所(普通合伙) | 代理人： | 赵丽 |
| 地址： | 518020 广东省深*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 肺炎 非粘液 高毒力 定性检测 标志物 试剂盒 毒力 聚合酶链反应 生物检测技术 特异性序列 临床应用 设计引物 粘液 基因组 检测 菌株 基因 保证 | ||
1.非粘液型肺炎克雷伯菌内
2.根据权利要求1所述的用于检测高毒力非粘液型肺炎克雷伯菌的试剂盒，其特征在于，包括PCR反应液、用于扩增标志物SEQ ID NO.1的引物、阳性对照及阴性对照；其中，引物包括上游引物和下游引物，上游引物序列为5’- AACAGGCGGCTGAACATACA-3’，下游引物序列为5’- TTTACCCTGCTGCGCTCATT-3’。
3.根据权利要求2所述的用于检测高毒力非粘液型肺炎克雷伯菌的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液包括浓度为5U/μL Taq聚合酶、浓度为200mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液、浓度为20mmol/L氯化镁溶液、浓度为500mmol/L氯化钾溶液、体积比为0.2%曲拉通溶液、体积比为10%甲酰胺溶液以及浓度为10mmol/L脱氧核糖核苷三磷酸。
4.根据权利要求2所述的用于检测高毒力非粘液型肺炎克雷伯菌的试剂盒，其特征在于，所述上游引物及下游引物浓度均为0.5μmol/L。
5.根据权利要求2所述的用于检测高毒力非粘液型肺炎克雷伯菌的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为经全基因组测序确定含有标志物
所述阴性对照为经全基因组测序确定不含有标志物
6.根据权利要求2所述的用于检测高毒力非粘液型肺炎克雷伯菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒使用中：配制PCR扩增体系，并将PCR扩增体系分别在转速为3000rpm的条件下，离心30s，再放置于PCR仪中扩增。
7.根据权利要求6所述的用于检测高毒力非粘液型肺炎克雷伯菌的试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增体系配制中，依次加入PCR反应液、上游引物及下游引物，再加入非粘液型肺炎克雷伯菌培养液、阳性对照、阴性对照或灭菌水。
8.根据权利要求6所述的用于检测高毒力非粘液型肺炎克雷伯菌的试剂盒，其特征在于，所述扩增反应的条件为：
在94℃条件下反应3min；然后35个循环，其中，包括依次在94℃条件下反应30s，在60℃条件下反应30s，在72℃条件下反应30s；最后，在72℃条件下反应5min，然后在4℃条件下保持。
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