[发明专利]一种大肠杆菌活化发酵方法

说明书

本发明适用于微生物技术领域，提供了一种大肠杆菌活化发酵方法，包括：取出大肠杆菌接种于培养基上，得到一级平板；取单菌落继续接种于培养基上，得到二级平板；取多个单菌落接种于液体培养基中，旋转培养得到一级种子液；取一级种子液继续接种于液体培养基中，旋转培养得到二级种子液；取二级种子液接种于发酵底液中进行发酵，并采取溶氧反馈的方式进行补料；加入诱导培养基诱导蛋白表达，并采取恒pH补料进行补料继续进行发酵。本发明实施例提供的大肠杆菌活化发酵方法，通过两次平板培养以及两次液体培养，得到二级种子液，能够有效地实现菌种的复壮，有效提高了后续发酵过程的稳定性以及目标产物的表达量。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，尤其涉及一种大肠杆菌活化发酵方法。

背景技术

发酵工程是生物技术的重要组成部分，是生物技术产业化的重要环节。发酵技术有着悠久的历史，作为现代科学概念的微生物发酵工业是在传统发酵技术的基础上，结合了现代的基因工程、细胞工程等的新技术，在发酵过程中常常伴随着蛋白的表达。在微生物发酵过程中，菌种活化是保证发酵稳定的前提也影响着目标蛋白的表达，是至关重要的一个环节。

然而，现有的菌种活化文献报道常采用的是菌种复壮后，斜面培养，接入摇瓶在摇床上培养一段时间后，再以一定接种量接入发酵罐进行发酵，但是这样的活化过程还存在着发酵不稳定、目标产物表达量较低的情况。

可见，现有的菌种活化过程还存在着后续发酵不稳定、目标产物表达量低的技术问题。

发明内容

本发明实施例的目的在于提供大肠杆菌活化发酵方法，旨在解决现有的菌种活化过程还存在着后续发酵不稳定、目标产物表达量低的技术问题。

本发明实施例是这样实现的，一种大肠杆菌活化发酵方法，包括以下步骤：

从冻存管取出大肠杆菌接种于第一培养基上，培养16~24小时后，得到一级平板；

在一级平板上取单菌落大肠杆菌接种于第二培养基上，培养16~24小时后，得到二级平板；

在二级平板上取多个单菌落大肠杆菌接种于第一液体培养基中，在25℃~37℃环境下旋转培养6~10小时，得到一级种子液；

取一级种子液接种于第二液体培养基中，在25℃~37℃环境下旋转培养12~20小时，得到二级种子液；

取二级种子液接种于发酵底液中进行发酵，并采取溶氧反馈的方式加入发酵补料进行补料；

发酵9~10小时后，加入诱导培养基诱导蛋白表达，并继续发酵，发酵过程中采取恒pH补料的方式加入发酵补料进行补料。

本发明实施例提供的大肠杆菌活化发酵方法，在从冻存管取出大肠杆菌接种于第一平板培养基上，培养16~24小时后，再从第一平板培养基上取单菌落大肠杆菌继续接种于第二培养基，培养16~24小时，得到二级平板，再在二级平板上取多个单菌落大肠杆菌接种于第一液体培养基中，旋转培养6~10小时，得到一级种子液，再取一级种子液接种于第二液体培养基中，旋转培养12~20小时，得到二级种子液，最终将二级种子液接种于发酵底液进行发酵，以溶氧反馈的方式加入发酵补料进行补料，再加入诱导培养基诱导蛋白表达，并持续发酵。本发明实施例提供的大肠杆菌活化发酵方法，通过两次平板培养以及两次液体培养，得到二级种子液，能够有效地实现菌种的复壮，有效提高了后续发酵过程的稳定性以及目标产物的表达量。

附图说明

图1为本发明提供的实施例3以及对比例1的发酵结果的蛋白质电泳结果图。

具体实施方式