[发明专利]一种脱除异种角膜细胞的方法有效
| 申请号： | 201911066190.6 | 申请日： | 2019-11-04 |
| 公开（公告）号： | CN110772665B | 公开（公告）日： | 2023-01-17 |
| 发明（设计）人： | 王海利;张晋南;宇咏梅;唐小琪;马百双;甘良波 | 申请（专利权）人： | 深圳艾尼尔角膜工程有限公司 |
| 主分类号： | A61L27/36 | 分类号： | A61L27/36 |
| 代理公司： | 北京康盛知识产权代理有限公司 11331 | 代理人： | 董娣 |
| 地址： | 518112 广东省深圳市龙岗区吉华街道甘李*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 脱除 角膜 细胞 方法 | ||
1.一种脱除异种角膜细胞的方法，其特征在于，包括预脱步骤和脱除步骤，
所述预脱步骤包括：将角膜密封后置于液氮中冷冻，再将冷冻后的角膜置于水浴中解冻；
所述脱除步骤包括：将解冻后的角膜放入脱细胞试剂中进行振荡，再将振荡后的角膜置于等渗液中进行超声，以脱除角膜细胞；
所述脱细胞试剂包含0.2-1.0%中性蛋白酶和0.01-0.20%EDTA；
所述等渗液具有不会使角膜胶原纤维结构改变的渗透压参数；
在所述脱除步骤之后还包括将脱细胞后的角膜放入软化液中静置，所述软化液具有促进角膜胶原微观结构恢复的作用，所述软化液含有聚乙烯比咯烷酮。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述冷冻的时长为5-60min；所述水浴的温度是20-37℃，所述角膜在水浴中的持续时长是10-30min。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述振荡是指：在4-45℃的脱细胞试剂中振荡10-120min。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述等渗液为生理盐水或/和PBS缓冲液，所述超声的频率为10-100kHz，超声持续时长为8-15min。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，重复所述预脱步骤1-5次，或/和，重复所述脱除步骤1-8次。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，交替重复预脱步骤和脱除步骤1-5次，以脱除步骤为结束。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述预脱步骤之前还包括去除角膜上皮层之后进行削切，以获取厚度为200-500μm的板层角膜。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述软化液还含有透明质酸和/或L-天冬氨酸。
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