[发明专利]乙酰激酶ackA基因缺失的应用

说明书

本发明公开了一种乙酰激酶ackA基因缺失的应用，属于基因工程技术领域。本发明利用λ‑Red重组技术构建鸡白痢沙门菌ackA基因缺失株，并对其生物学特性和毒力进行研究，明确了ackA基因缺失引起鸡白痢沙门菌毒力下降；用同样的方法证明ackA基因缺失也能引起肠炎沙门菌毒力下降；为设计鸡白痢沙门菌疫苗靶点以及肠炎沙门菌疫苗靶点提供参考，进而防治沙门菌感染。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，更具体的说是涉及乙酰激酶ackA基因缺失的应用。

背景技术

大肠杆菌等肠道菌能够分泌和利用乙酸，这种能力对于细菌在肠道酸性环境下生存，保持竞争优势具有重要意义。细菌乙酸分泌过程主要受Pta-AckA和PoxB通路调控，其中Pta-AckA通路能够快速调控细菌乙酸的合成和消耗，以应对外环境乙酸浓度变化，是乙酸合成的主要途径。此外，在S.aμreμs的研究发现，将Pta-AckA通路灭活，会引起细菌的生长和活力的大幅度下降。揭示了该通路对于细菌的存活能力具有重要意义。

Pta-AckA通路包含两个关键酶--磷酸乙酰转移酶(Pta)和乙酰激酶(AckA)，两者协同作用，缺一不可。在营养丰富的条件下，Pta可以催化糖代谢产物乙酰辅酶A合成中间分子乙酰磷酸，而AckA进一步催化乙酰磷酸生产乙酸；而在营养贫瘠时，这一过程可逆，细菌可以通过Pta-AckA通路利用环境中的乙酸生成乙酰辅酶A以供给能量。正是由于该通路的存在，细菌才能够在复杂营养环境下得以存活。此外，有研究发现，Pta-AckA通路的中间产物乙酰磷酸盐，参与调控大肠杆菌众多功能性蛋白的乙酰化和磷酸化，揭示Pta-AckA可能与细菌的多种生物学过程相关。

基于此，本发明利用Red同源重组方法构建乙酰激酶ackA基因缺失株，并对其生物学特性和毒力进行研究，明确ackA基因缺失与鸡白痢沙门菌毒力之间的关系，为鸡白痢沙门菌疫苗开发提供工具和基础是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种乙酰激酶ackA基因缺失的应用，用于明确ackA基因缺失与沙门菌毒力之间的关系。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

乙酰激酶ackA基因缺失用于降低鸡白痢沙门菌的毒力。

进一步，乙酰激酶ackA基因缺失在鸡白痢沙门菌疫苗中的应用。

进一步，鸡白痢沙门菌ackA基因缺失株的构建方法，具体步骤如下：

(1)以质粒pKD3为模板，利用引物P1和P2，经PCR扩增，获得cat基因片段；所述引物序列为：

P1：5’-ATGTCGAGTAAGTTAGTACTGGTTCTGAACTGCGGTAGTTCTTCACTGAAATTTGCAAGTGTAGGCTGGAGCTGCTTCG-3’，SEQ ID NO.1；

P2：5’-CGACTGCATCCAGACGACCGTCCATCAGAGCGGTGTAAGAACCGATGTACTTCGCCAGATGGGAATTAGCCATGGTCC-3’，SEQ ID NO.2；

(2)将cat基因片段电转化进入含有pKD46质粒的ATCC19945感受态细胞中，获得阳性重组子ATCC19945::cat；

(3)利用ATCC19945::cat菌株制备感受态细胞，电转化导入pCP20质粒，得到目的菌株ATCC19945ΔackA；

(4)对目的菌株ATCC19945ΔackA进行PCR验证。

进一步，乙酰激酶ackA基因缺失用于降低肠炎沙门菌的毒力。

进一步，乙酰激酶ackA基因缺失在沙门菌疫苗中的应用。