[发明专利]一种丝棉木松散型胚性愈伤组织诱导方法和应用

权利要求书

1.一种丝棉木松散型胚性愈伤组织诱导方法，其特征在于：步骤如下：

⑴取不带侧芽的丝棉木新稍茎段为外植体，在含有1mg/L激素2,4-D和30g/L蔗糖的MS培养基上诱导出松散型愈伤组织；

⑵将松散型愈伤组织转接到含有0.5mg/L激素BA、0.5mg/L激素2,4-D和30g/L蔗糖的MS培养基上，经过30d培养，获得胚性愈伤组织；

⑶将诱导出的胚性愈伤组织转接到含有0.25mg/L激素BA、0.5mg/L激素2,4-D和30g/L蔗糖的MS培养基上，继代时将结构松散的愈伤组织转接到新的培养基上，继代时间为10d，培养温度为23℃，经过3-5次继代培养，即获得生长稳定的丝棉木松散型胚性愈伤组织。

2.根据权利要求1所述的丝棉木松散型胚性愈伤组织诱导方法，其特征在于：所述步骤⑴中丝棉木新稍茎段的制备步骤如下：

将丝棉木新稍在超净台中剪成小段，每个茎段上不要带有侧芽，选用没有木质化的新稍部位；将剪好的新稍茎段先在70％的乙醇中浸泡30s，取出后将其浸泡在事先配制的消毒液中进行表面消毒，消毒液为次氯酸钠水溶液，其中有效氯含量为2％，消毒时间设置为15min，将经过消毒的丝棉木茎段用灭菌后的蒸馏水反复冲洗茎段表面，将多余的消毒液洗干净，每次冲洗时间为10min，将表面消毒后的茎段用无菌滤纸吸干多余水分。

3.根据权利要求1所述的丝棉木松散型胚性愈伤组织诱导方法，其特征在于：所述步骤⑴中培养基灭菌前的pH值为5.8。

4.根据权利要求1所述的丝棉木松散型胚性愈伤组织诱导方法，其特征在于：所述步骤⑴中诱导时的条件为：25℃连续光照条件下培养，光照强度为1000Lx，培养40±2d。

5.根据权利要求1所述的丝棉木松散型胚性愈伤组织诱导方法，其特征在于：所述步骤⑵中将松散型愈伤组织在超净台中切成大小3-5mm的小块后再进行转接。

6.根据权利要求1所述的丝棉木松散型胚性愈伤组织诱导方法，其特征在于：所述步骤⑵中培养的条件为25℃连续光照，光照强度2000Lx。

7.根据权利要求1至6任一项所述的丝棉木松散型胚性愈伤组织诱导方法，其特征在于：所述步骤⑵中⑶将诱导出的胚性愈伤组织在超净台中切成大小3mm小块再进行转接。

8.如权利要求1至7任一项所述的丝棉木松散型胚性愈伤组织诱导方法在丝棉木的组培快繁或离体诱变育种方面中的应用。