[发明专利]一种L-半胱氨酸的多模式检测方法

说明书

本发明公开了一种L‑半胱氨酸的多模式检测方法，包括以下步骤：1)将0.5mL PEI均匀分散在24.5mL超纯水中，将均匀溶液转移到50mL衬有特氟龙的不锈钢反应容器中，180℃下密封反应6h，自然冷却至室温，将反应物用超纯水透析24h后，得到浅黄色PQDs溶液；2)在比色皿中加入HAc‑NaAc缓冲液，在缓冲液中加入CuCl₂和步骤1)所得PQDs溶液，室温下混合反应1min；3)向步骤2)反应后的溶液中加入L‑半胱氨酸的水溶液，室温下混合反应1min后测定荧光强度和紫外吸光度。本发明可用多信号的方式对L‑半胱氨酸进行区分检测，增加了足够的可信度，检测过程简单、快速，在10分钟内即可完成。

技术领域

本发明涉及化合物的检测，尤其涉及一种L-半胱氨酸的多模式检测方法。

背景技术

L-半胱氨酸，L-谷胱甘肽和L-高半胱氨酸是一类含有还原性巯基的小分子化合物，在维持细胞代谢，细胞信号传递，氧化还原平衡和免疫等正常生理功能方面发挥着重要作用。L-半胱氨酸是一种人体必需的氨基酸中唯一含有还原性巯基的氨基酸，是生物体内硫代谢的中心物质，其含量的异常会引发一些疾病，如生长缓慢，青春期皮肤病变，心脑血管病，阿尔茨海默氏症和帕金森病。L-谷胱甘肽是含巯基的三肽，L-高半胱氨酸与L-半胱氨酸的区别在于还原性巯基前面含有一个亚甲基。由于其结构与L-半胱氨酸的近似性，如何实现L-半胱氨酸的特异性检测显得十分重要。迄今为止，已经有许多方式应用于L-半胱氨酸的检测，包括高效液相色谱法，电化学分析法，原子吸收法和荧光分析法等，但是大多数方式对三种巯基化合物均响应程度近似且为单信号检测。

碳量子点在2004年被Xu等人首次发现。碳量子点相比于传统硅量子点具有绿色环保，合成方法简单和生物相容性好等优势。通过表面改性以及杂元素掺杂才改变其量子产率低，荧光寿命短以及活性位点少等缺点。杂原子掺杂包括金属元素和非金属元素掺杂两类，其中非金属(例如氮，磷，硫元素)掺杂更加简单环保，由此受到人们的广泛关注。

聚乙烯亚胺(PEI)是一种水溶性阳离子聚合物，已被广泛应用于高分子染料，催化，纤维改性和离子交换树脂领域。近年来，PEI还广泛用于制备氮掺杂量子点(N-CQD)。罗等人报道了使用PEI和L-谷胱甘肽合成的CQDs用于灵敏的检测Hg²⁺，Hg²⁺附着在N-CQDs的表面，荧光的猝灭可以解释为电子转移机制猝灭。Hg²⁺的线性范围为0.1-100μM，检测极限为32nM。此外，还有多步合成法。过硫酸铵将PEI氧化成富氧物质，然后水热法制得N-CQDs，量子产率高，达54.3％N-CQDs可以用于细胞成像和基因传递，这归因于N-CQDs的优异的光致发光性和出色的生物相容性。总而言之，这些N-CQDs是由PEI和其他物质合成的，繁琐的实验步骤增加了经济和时间成本。

发明内容

针对L-半胱氨酸检测过程中，L-谷胱甘肽和L-高半胱氨酸干扰较大，且均为单模式检测的问题，本发明提供一种L-半胱氨酸的多模式检测方法。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种L-半胱氨酸的多模式检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将0.5mL PEI均匀分散在24.5mL超纯水中，将均匀溶液转移到50mL衬有特氟龙的不锈钢反应容器中，180℃下密封反应6h，自然冷却至室温，将反应物用超纯水透析24h后，得到浅黄色聚乙烯亚胺基的氮掺杂量子点(PQDs)溶液；

2)在比色皿中加入HAc-NaAc缓冲液，在缓冲液中加入CuCl₂和步骤1)所得PQDs溶液，室温下混合反应1min；

3)向步骤2)反应后的溶液中加入L-半胱氨酸的水溶液，室温下混合反应1min后测定荧光强度和紫外吸光度。