[发明专利]新颖重组博德特氏菌菌株

说明书

本发明涉及新颖重组博德特氏菌菌株。本发明提供了一种遗传学上减毒的百日咳博德特氏菌菌株，其包含突变的百日咳毒素(ptx)基因和异源amp G基因并且对包含丝状血凝素(FHA)的N‑端片段和不同于FHA的一种异源表位或抗原蛋白质或蛋白质片段的杂合蛋白质进行表达，其中编码天然FHA蛋白质的基因是失活的。本发明进一步提供用于治疗粘膜或全身性感染性疾病的活减毒疫苗，包含如上所定义的百日咳博德特氏菌菌株。本发明还涉及用于预防哺乳动物的感染性疾病的方法以及用于增强哺乳动物对病原体的免疫反应的方法，包含向所述哺乳动物给予有效量的疫苗，该疫苗包含如上所定义的百日咳博德特氏菌菌株。

本申请是申请日为2013年10月17日，申请号为201380053317.5，发明名称为“新颖重组博德特氏菌菌株”的申请的分案申请。

技术领域：

本发明涉及对一种异源蛋白质进行表达的新颖遗传学上减毒的百日咳博德特氏菌菌株和其作为疫苗，即用于粘膜免疫接种的用途。

本发明进一步涉及一种用于增加一种博德特氏菌菌株的免疫原性的方法。

背景技术：

例如疫苗的经鼻递送等粘膜免疫接种具有多种优于经典肠胃外疫苗接种的优势。它们无针，不易受到污染，不太依赖于经过训练的医疗或辅助医务人员，可以诱导全身性和粘膜免疫性并且可能更适合于保护免受粘膜感染。

但是，当经鼻提供时大部分抗原是不佳的免疫原并且需要添加有效的粘膜佐剂。最有效的粘膜佐剂之一是霍乱毒素或紧密相关的大肠杆菌不耐热肠毒素和其解毒衍生物。令人遗憾的是，将这种佐剂添加到经鼻疫苗配制品中已引起了贝尔麻痹(Bell's palsy)(穆施(Mutsch)等人，2004)并且因此不可以在人类中使用。

本发明的作者最近研发了一种对抗百日咳的经鼻的活减毒候选疫苗(米埃尔卡雷克(Mielcarek)等人，2006)，该疫苗现在成功地完成首次人体I期安全试验(索斯滕松(Thorstensson)等人，准备中)。这一候选疫苗的概念是基于以下发现：通过气雾剂暴露的百日咳博德特氏菌自然感染甚至在极幼小婴儿中也能够诱导强烈的全身性B和T细胞反应(马斯卡特(Mascart)等人，2003)，以及粘膜免疫性。此外，在非人类灵长类动物中的先前研究得出了“抗百日咳的最终保护可能最佳由活百日咳博德特氏菌接种产生”(黄(Huang)等人，1962)的结论。

百日咳博德特氏菌菌株是基于百日咳博德特氏菌毒性的分子机制的知识(洛赫特(Locht)等人，2001)减毒的并且通过在遗传学上使百日咳毒素失活，通过使皮肤坏死毒素基因缺失并且通过将百日咳博德特氏菌的ampG基因交换成大肠杆菌ampG，由此消除气管细胞毒素的产生来构建。在临床前模型中，这一名为BPZE1的候选疫苗显示极好的安全性(米埃尔卡雷克等人，2006，2010；斯凯利(Skerry)等人，2009；卡瓦纳(Kavanagh)等人，2010；李(Li)等人，2010)并且在单一经鼻给予后诱导快速、强烈且持久的免疫性(弗努(Feunou)等人，2010)。

此外，出人意料地发现，当向小鼠经鼻给予时，BPZE1菌株能够引发抵抗气道的过敏和发炎病状(即哮喘)并且还抵抗异位性过敏的保护性反应。

雷夫诺(Reveneau)等人披露一种缺乏毒素产生并且对包含丝状血凝素(FHA)的N-端片段和保护性破伤风毒素片段C(TTFC)的杂合蛋白质进行表达的遗传学上减毒的博德特氏菌菌株，该菌株不产生成熟FHA。

科彭斯(Coppens)等人披露一种缺乏毒素产生并且对包含丝状血凝素(FHA)的N-端片段和脑膜炎双球菌的TbpB的杂合蛋白质进行表达的遗传学上减毒的博德特氏菌菌株，该菌株不产生成熟FHA。

阿隆索(Alonso)等人披露一种缺乏毒素产生并且对包含丝状血凝素(FHA)的N-端片段和不可分型流感嗜血杆菌的HtrA蛋白质的杂合蛋白质进行表达的遗传学上减毒的博德特氏菌菌株，该菌株不产生成熟FHA