[发明专利]一种石斛的全二维液相分离方法

说明书

本发明涉及天然药物中活性成分分离技术领域，为解决传统石斛属植物提取方法程序繁琐、使用有毒溶剂、提取效率和回收率低的问题，提供了一种石斛的全二维液相分离方法，包括以下步骤：(1)将石斛原料粉碎，过三号筛，得石斛粉末；(2)将石斛粉末采用基质固相分散提取法进行提取，得石斛提取液；(3)将石斛提取液通过二维超高效液相色谱与质谱联用进样分析表征分离效果。本发明将二维超高效液相色谱与质谱联用技术与基质固相萃取技术巧妙结合起来，实现便捷高效地分离提取天然产物中的有效成分。

技术领域

本发明涉及天然药物中活性成分分离技术领域，尤其涉及一种石斛的全二维液相分离方法。

背景技术

二维超高效液相色谱是一种理想而强大的工具，由于其峰容量大，分辨率高，因此在解决复杂性方面引起了更多的关注。在二维超高效液相色谱系统中，峰、部分或整个色谱图在各种色谱柱的帮助下经历不同的分离机制。二维超高效液相色谱方法可分为全二维和多中心切割，其依赖于样品的所有组分是否都转移到第二维。在全二维模式中，第一维的全部组分被送至第二维。这通过将一维检测器的效率收集到两个循环中来获得，所述循环交替地移位到二维色谱柱中。该组合要求第二维快速分离(分离时间代表性的小于1分钟)以提高采样频率并保持一维分离。此外，上述方案可用于分离复杂化合物，同时与质谱联用，已用于分离蛋白质、草药提取物和天然产物中的活性成分。

石斛属植物是一种重要的滋补品和功能性食品，属于兰科植物中的多年生草本植物.。石斛有成千上百种，包括铁皮石斛、霍山石斛、金钗石斛、黄草石斛、铜皮石斛和鼓槌石斛等，其中主要分布于中国的浙江、安徽、贵州和云南。石斛属中含有多种活性成分，例如多糖、黄酮、生物碱、芪类、氨基酸、菲类、联苄和酚类等。而且石斛属物种具有重要的药理作用，并提供大量的有益功能，如消热，增强视力，维持胃张力，改善体液产生和免疫调节影响等。由于石斛属重要的药理作用，因此开发和研究石斛的质量控制方法是必要的。然而，根据现有的文献报道，其样品前处理方法很复杂，缺乏更全面的方法来分析石斛属中的活性成分。

现有的文献有多种石斛属植物提取方法，比如说超声/微波辅助固液分散提取，加压液体提取，索氏提取，代谢提取，机械化学提取，DNA提取等。然而，这些大多数提取方法操作繁琐，耗费时间、金钱和劳动力。而且，这些方法通常涉及繁琐的程序，使用有毒的有机溶剂，方法条件处于高温或暴露于辐射，消耗大量的样品和溶剂，导致提取方法提取效率和回收率低。因此，利用高效绿色的样品预处理方法和高精密度的色谱技术来分析、测定和分离铁皮石斛中的痕量化合物是必不可少的。

发明内容

本发明为了克服传统石斛属植物提取方法程序繁琐、使用有毒溶剂、提取效率和回收率低的问题，提供了一种分离度高、灵敏度高的石斛的全二维液相分离方法。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种石斛的全二维液相分离方法，包括以下步骤：

(1)将石斛原料粉碎，过三号筛，得石斛粉末；

(2)将石斛粉末采用基质固相分散提取法进行提取，得石斛提取液；

(3)将石斛提取液通过二维超高效液相色谱与质谱联用进样分析表征分离效果。

本发明方法分离环节创意新颖，思路巧妙。成功采用二维液相与质谱联用作为分析方法用于天然产物提取和分离的领域，并在全二维模式下实现石斛中16种化合物的成功分离和鉴定。该分离检测体系具备一系列优异突出的特性：操作简单、仪器灵敏度和稳定性良好，操作环境安全可靠。本发明提供的实验提取和分离效果高效显著，且操作环境安全，操作步骤简洁明了。

作为优选，所述基质固相分散提取法包括以下步骤：将石斛粉末与分散剂混合研磨后，将所得混合物填充入固相萃取小柱，经洗脱、离心，取上层清液得石斛提取液。