[发明专利]C-反应蛋白胶体金检测试剂卡及其制备方法

说明书

本发明属于医学检测领域，具体涉及C‑反应蛋白胶体金检测试剂卡及其制备方法和应用。本发明的胶体金检测试剂卡具有成本低廉、检测样品无需处理、检测时间短、准确率高等特点，可以实现免除常规抽血取样、无痛检测的目的。

技术领域

本发明属于医学检测领域，具体涉及C-反应蛋白胶体金检测试剂卡及其制备方法。

背景技术

目前，利用核磁共振光谱、气相色谱、质谱和液相色谱分析等技术可在人类尿液中检测到3000多种化学物质或“代谢产物”，因此，尿液可用于无创诊断，从而提示人体的健康情况。例如，当尿液中检出蛋白时，说明身体中蛋白增多，蛋白会跨过肾脏进入尿液中。因此通过分析尿液中的特定物质，判断身体是否处于健康状态，甚至可对疫病进行初步诊断。

一方面，胶体金免疫层析法具有检测成本低、检测速度快的特点，但是相对于化学发光法和荧光放射检测法等检测平台，胶体金免疫层析法的灵敏度较低，同时由于尿液中蛋白(多由单体和聚合体蛋白组成)含量也较低，因此，不易检出。另一方面，在提高胶体金免疫层析法对蛋白的检测灵敏度后，其系统稳定性和假阳性问题会随之产生。

发明内容

本发明的目的在于提供一种C-反应蛋白胶体金检测试剂卡。

本发明的再一目的在于提供上述胶体金检测试剂卡的制备方法。

根据本发明具体实施方式的C-反应蛋白胶体金检测试剂卡，其由包括以下步骤的方法制备得到：

(1)纯化C反应蛋白单克隆抗体；

(2)将纯化的C单克隆抗体、兔抗鼠IgG分别加入到划膜缓冲液中，混匀，得到浓度为按350ul/mL的C抗体划膜缓冲体系、浓度为500ul/mL的兔抗鼠IgG划膜缓冲体系，并分别包被到硝酸纤维素膜的检测线和质控线上，其中，划膜缓冲液为浓度0.05M、pH7.0的磷酸缓冲液，所述划膜缓冲液中还包含95％乙醇溶液和叠氮钠，磷酸缓冲液、95％乙醇溶液、叠氮钠的体积比为94.9：5：0.1；

(3)将纯化的C反应蛋白单克隆抗体加入到标记缓冲液中，混匀后，加入牛血清白蛋白，混匀，静置，得到沉淀，即为金标抗体；

(4)将步骤(3)所得金标抗体用金悬浮液进行复溶后，负载于基质上，干燥，得到胶体金垫；

(5)将步骤(4)得到的胶体金垫与步骤(2)包被后的硝酸纤维素膜进行组装，得到C-反应蛋白胶体金检测试剂卡。

根据本发明具体实施方式的C-反应蛋白胶体金检测试剂卡，步骤(4)中，所述金悬浮液为浓度0.02M、pH 8.5的Tris-NaCl缓冲液，所述金悬浮液中还包含5％牛血清白蛋白、5％蔗糖、2％明胶和0.1％叠氮钠。

根据本发明具体实施方式的C-反应蛋白胶体金检测试剂卡，步骤(4)中，量取的金悬浮液与胶体金溶液体积相等，其中，胶体金溶液中金颗粒为40nm。

根据本发明具体实施方式的C-反应蛋白胶体金检测试剂卡，步骤(3)中，用0.2M碳酸钾溶液将40nm胶体金溶液调整为pH 8.0，得到所述标记缓冲液。

根据本发明具体实施方式的C-反应蛋白胶体金检测试剂卡，步骤(1)中，利用金黄色葡萄球菌蛋白A亲和层析纯化法纯化所述C反应蛋白。

根据本发明具体实施方式的C-反应蛋白胶体金检测试剂卡的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)纯化C反应蛋白单克隆抗体；