[发明专利]一种四环素提取纯化方法

说明书

本发明涉及一种四环素提取纯化方法，其工艺步骤为：首先将四环素发酵液加水稀释，降温酸化，然后用陶瓷膜分离，所得滤洗液间隔5～10min依次加入黄血盐和硫酸锌搅拌反应，之后板框过滤，通碱结晶，最后经过滤、脱水、干燥得到四环素成品。本发明采用先将稀释酸化的四环素发酵液采用陶瓷膜分离，然后再以净化、分离的方式提取纯化四环素，可使得四环素质量显著提高，收率提高3～5%，同时减少了净化剂的使用，提高了膜运行效率，降低了生产成本。

技术领域

本发明属于生物与新医药技术领域，特别是涉及一种四环素提取纯化方法。

背景技术

四环素(erythromycin，Er)是一类四环类抗生素，对革兰氏阳性菌、阴性菌、立克次体、滤过性病毒、螺旋体属乃至原虫类都有很好的抑制作用，对结核菌、变形菌等则无效。其作用机制是与核蛋白体的30S亚单位结合后可阻止氨酰基tRNA同核蛋白体结合。

现有技术中，四环素是以金色链霉菌为发酵菌种，采用二级发酵模式发酵生产，其中四环素提取纯化可采用以下两种方法：一是将四环素发酵液稀释，然后经草酸一次性酸化、净化，然后板框或膜过滤，调节pH结晶析出得到四环素碱成品；二是将四环素发酵稀释，然后经草酸酸化、过滤，调节pH，加氯化钙，形成钙盐沉淀，再用草酸溶解，然后调节pH析出粗碱，经草酸水溶解、活性炭脱色，调节pH得到四环素碱成品。

目前，国内四环素生产企业通常采用第一种方法进行四环素提取纯化，这种方法存在如下问题：1、四环素发酵液采用一次性酸化，酸化液存放时间长，容易产生四差向四环素等杂质；2、在净化过程中，四环素及杂质浓度比较高，加入的净化剂在去除杂质的同时对四环素有吸附、包裹作用，导致在过滤过程中将这一部分四环素用酸水洗涤出来，比较困难；3、加入净化剂量比较大，使得整个发酵液变稠，净化作用效果减弱，滤液质量受到影响，进而影响到过滤效率，最终影响到四环素提取质量及收率。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种有效提高四环素成品的含量和收率，且降低生产成本的四环素提取纯化方法。

为实现上述发明目的所采取的技术方案为：

一种四环素提取纯化方法，其特征在于其工艺步骤为：首先将四环素发酵液加水稀释，降温、连续酸化，然后用陶瓷膜分离，所得滤洗液间隔5～10min依次加入黄血盐和硫酸锌搅拌反应，之后板框过滤，通碱结晶，最后经过滤、脱水、干燥得到四环素成品。

所述四环素加水稀释时，加水量为发酵液体积的0.5～2.0倍。

所述降温、连续酸化是指将稀释后的四环素发酵液降温至10～20℃，然后流加草酸，控制发酵液pH1.5～2.0，酸化时间5～10分钟。

所述陶瓷膜孔径为50～100nm，在陶瓷膜分离时，当四环素发酵液浓缩1.5～2倍时开始流加草酸水洗脱，洗脱过程温度控制在10～20℃，至四环素菌渣单位效价≤1000μg/ml停止。

所述黄血盐和硫酸锌均需要热溶加入，其加量均控制在50～80g/十亿。

本发明同现有技术相比，具有以下技术优势：

1、本发明采用先将四环素发酵液稀释，并以连续酸化处理的方式对四环素发酵液进行酸化处理，此过程通过控制酸化时间、温度和pH来缩短酸化液贮存时间，从而避免四环素的降解和被破坏，提高产品收率。