[发明专利]ACTH突变体、重组蛋白及其应用，以及含有该ACTH重组蛋白的试剂盒

说明书

本发明涉及生物技术领域，特别涉及ACTH重组蛋白及其应用，以及含有该ACTH重组蛋白的试剂盒。本发明涉及采用合成/体外表达系统(包括重组)等技术获得ACTH多肽或融合蛋白，并作为ACTH体外诊断试剂盒的标准品或某一组成成分来使用。对人ACTH的氨基酸进行体外合成或选择人ACTH氨基酸对应编码的核酸序列进行重组表达，在制备之前将ACTH对应的氨基酸序列中的KKRR(四处氨基酸是否同时突变，均包含在其中)进行突变(K变为非K，R的氨基酸；R变为非R，K的氨基酸)的设计，突变之后在ACTH免疫检测试剂中其ACTH的稳定性得到明显的提高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及ACTH突变体、重组蛋白及其应用，以及含有该ACTH重组蛋白的试剂盒。

背景技术

促肾上腺皮质激素缩写为ACTH，是由脑垂前叶分泌的激素。它具有刺激肾上腺皮质发育和机能的作用，主要作用于肾上腺皮质束状带，刺激糖皮质类固醇的分泌。由体外注射过量的皮质激素时，ACTH的分泌会受到抑制，肾上腺皮质发生萎缩，这被认为是引起“应激”状态所不可缺少的。ACTH还具有通过肾上腺皮质来调节抗体生成作用，与生长素起相反的作用。

ACTH的分泌过程是脉冲式的和应变的，释放的频率和幅度与昼夜交替节律性相关。总的趋势是清晨觉醒之前血液中ACTH水平出现高峰，半夜熟睡时则为低潮。应激情况下，如烧伤、损伤、中毒，以及遇到攻击使全身作出警戒性反应时，ACTH的分泌都增加，随即激发肾上腺皮质激素的释放，增进抵抗力。医学上可用于抗炎症、抗过敏等。

使用小肽(体外合成/合成肽)或重组抗原作为ACTH体外诊断试剂盒的组成成分已很常见，但是如何提高小肽(体外合成/合成肽)或某些蛋白的稳定性一直是困扰试剂和开发人员的难题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种ACTH突变体、重组蛋白及其应用，以及含有该ACTH重组蛋白的试剂盒。该ACTH重组蛋白的稳定性得到明显的提高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了ACTH突变体，如SEQ ID No.1所示的ACTH氨基酸序列的第15～18位氨基酸KKRR中的一个或多个氨基酸突变为非K和/或非R的氨基酸。

其中，ACTH(促肾上腺皮质激素)的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，ACTH(促肾上腺皮质激素)的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。表达了融合蛋白的ACTH的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示，表达了融合蛋白的ACTH的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

在本发明的一些具体实施方案中，所述的ACTH突变体具有：

(Ⅰ)、如SEQ ID No.5所示的氨基酸序列；或

(Ⅱ)、如(Ⅰ)所述的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列，且与(Ⅰ)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；或

(III)、如(Ⅰ)所述的氨基酸序列的修饰变体，且与(Ⅰ)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；或

(IV)与(Ⅰ)、(Ⅱ)或(III)所述氨基酸序列至少有80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％或99％同源性的氨基酸序列，且与(Ⅰ)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列。

在上述研究的基础上，本发明还提供了重组蛋白，包括所述的ACTH突变体和融合蛋白。在本发明的一些具体实施方案中，所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示，所述重组蛋白的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示。

本发明还提供了所述ACTH突变体或所述的重组蛋白在制备ACTH检测试剂或ACTH检测试剂盒中的应用。

此外，本发明还提供了编码所述ACTH突变体或所述的重组蛋白的核苷酸，具有