[发明专利]柞蚕表皮生长因子的截断蛋白AP-EGF及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种柞蚕表皮生长因子的截断蛋白AP‑EGF及其制备方法和应用，涉及基因功能研究技术领域，所述截断蛋白AP‑EGF的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。利用原核表达系统表达所述截断蛋白AP‑EGF后，经过包涵体蛋白的变复性和纯化后，进行细胞划痕实验和伤口愈合实验，结果表明，有划痕的HaCaT细胞系中，经过48h后，所述截断蛋白AP‑EGF与TGF‑β1产生了相似的细胞生长效果；对大鼠模型施加所述截断蛋白AP‑EGF后，第3d开始就有明显的治愈伤口效果，到第15d时伤口基本治愈，可将所述截断蛋白AP‑EGF用于制备促进细胞生长和伤口愈合的试剂或药物中。

技术领域

本发明属于基因功能研究技术领域，具体涉及种柞蚕表皮生长因子的截断蛋白AP-EGF及其制备方法和应用。

背景技术

人表皮生长因子是由50－60个氨基酸分子组成的肽链，它具有促进皮肤组织、角膜上皮组织及胃、肺、气管上皮细胞的繁殖，加速受伤表皮细胞的修复，还有抑制胃酸分泌等功效。广泛应用于烧伤、烫伤、创伤、溃疡类疾病的治疗及皮肤移殖和美容整形上，在医药及化妆品领域上有很广的用途。早期的EGF是从人的胎盘、尿液中提取的，资源有限，而且其中的含量极低。由于生产成本高、价格昂贵、产量低，满足不了市场需求等问题。

柞蚕，学名：Anthereapernyi(Guerin-Meneville,1855)，鳞翅目大蚕蛾科柞蚕属。蚕是一类人工大量饲养的昆虫，在其生长阶段由蚁蚕到成蚕需经四次蜕皮、体重也随之增长两千多倍，生长速度是大多数动物所不能比拟的。目前关于表皮生长因子的研究报道多见于哺乳动物中，对柞蚕EGF基因的相关报道和研究还未发现。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于一种柞蚕表皮生长因子的截断蛋白AP-EGF及其制备方法和应用，所述截断蛋白AP-EGF具有显著的促进细胞生长和伤口愈合作用，可用于制备相应的试剂或药物，从而解决了生产成本高、价格昂贵、产量低，满足不了市场需求等问题。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种柞蚕表皮生长因子的截断蛋白AP-EGF，所述截断蛋白AP-EGF的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供了所述截断蛋白AP-EGF的制备方法，包括以下步骤：将柞蚕表皮生长因子的基因EGF经过转录翻译后，得到柞蚕表皮生长因子EGF，去除所述柞蚕表皮生长因子EGF的跨膜区域，得所述截断蛋白AP-EGF；所述柞蚕表皮生长因子的基因EGF的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述柞蚕表皮生长因子EGF的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

优选的，所述柞蚕表皮生长因子EGF的跨膜区域分别在47～70氨基酸处和160～183氨基酸处。

本发明还提供了一组检测所述制备方法中柞蚕表皮生长因子的基因EGF的引物对，包括正向引物AP-EGF-S1和反向引物AP-EGF-AS1，所述正向引物AP-EGF-S1的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述反向引物AP-EGF-AS1的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

本发明还提供了所述截断蛋白AP-EGF或利用所述制备方法制备得到的截断蛋白AP-EGF或所述引物对在制备促细胞生长试剂中的应用。

本发明还提供了所述截断蛋白AP-EGF或利用所述制备方法制备得到的截断蛋白AP-EGF或所述引物对在制备促细胞生长药物中的应用。

本发明还提供了所述截断蛋白AP-EGF或利用所述制备方法制备得到的截断蛋白AP-EGF或所述引物对在制备促进伤口愈合试剂中的应用。

本发明还提供了所述截断蛋白AP-EGF或利用所述制备方法制备得到的截断蛋白AP-EGF或所述引物对在制备刺进伤口愈合药物中的应用。