[发明专利]一种靶向Frizzled7单克隆抗体及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种靶向Frizzled7单克隆抗体及其制备方法与应用。靶向Frizzled7单克隆抗体，记为SHH002，靶向Frizzled7单克隆抗体具有重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQ ID No.5所示的CDR1，SEQ ID No.6所示的CDR2，和SEQ ID No.7所示的CDR3；所述轻链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQ ID No.8所示的CDR1’，SEQ ID No.9所示的CDR2’，和SEQ ID No.10所示的CDR3’。本发明还介绍了所述抗体在制备治疗肿瘤药物中的应用。本发明抗体显示出了与抗原的超高亲和力(亲和力常数达到1×10^‑12M)。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种靶向Frizzled7单克隆抗体及其制备方法与应用。

背景技术

Wnt信号通路是一类在物种进化过程中高度保守的信号通路，其在动物胚胎的早期发育、器官形成和肿瘤的发生发展中，发挥至关重要的作用。Wnt蛋白家族与受体Frizzled(Fzd)的N端胞外结构区CRD(cysteine-rich domain)结合，与Dvl(disheveled)蛋白相互作用并激活下游信号通路。Fzd蛋白是一类具有七次跨膜分子结构的Wnt受体家族，该家族中有10个成员蛋白，Frizzled-7(Fzd7)为成员之一。研究表明Wnt受体Fzd7异常表达于不同种类的癌症中(包括三阴性乳腺癌(TNBC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、肝癌(HCC)等)(Polakis P,2012,EMBO J,31:2737-46；King TD et al,2012,J Cell Biochem,113:13-8)；Fzd7通过激活经典Wnt通路(Wnt/β-catenin)来诱导肿瘤的发生和转移。

Wnt通路参与肿瘤的侵袭和转移，且对肿瘤血管生成也有调节作用，对Fzd7进行基因敲除可以显著抑制肿瘤细胞增殖、移植瘤生长及血管新生。Wnt信号和肿瘤干细胞行为也存在密切联系，Fzd7就是肿瘤干细胞标记物之一，且这些肿瘤干细胞中Fzd7的上调与肿瘤化疗耐受以及病人的低生存率显著相关(Barker N et al.,2009,Nature,457:608-11)。另外Fzd7的“context-specific functions”暗示了选择性靶向Fzd7可以在不影响正常组织稳态的前提下治疗癌症。综上，Fzd7是多种肿瘤的潜在治疗靶点(Kahn M,2014,Nat RevDrug Discov,13:513-32)。

目前靶向Fzd7方法主要有RNA干扰、小分子抑制剂、小干扰肽、可溶性重组Fzd7蛋白以及抗Fzd7单抗。Fzd7shRNA可以有效抑制TNBC细胞的增殖侵袭及肿瘤生长；小干扰肽RHPDs或小分子抑制剂FJ9干扰Fzd7和分散蛋白(Dvl)的结合来阻断Wnt信号，并有效抑制小鼠移植瘤的生长(Nambotin SB et al.,2011,J Hepatol,54:288-99；Fujii N et al.,2007,Cancer Res,67:573-9)；使用Fzd7的胞外区重组蛋白(sFzd7)与细胞表面Fzd7竞争性结合Wnt3配体来阻断Wnt/β-catenin信号也并抑制肿瘤发生发展(Wei W et al.,2011,MolCancer,10:16)；以上几种方法目前仍处于临床前研究阶段。相比之下，更利于临床转化的方法是利用抗体来特异性靶向Fzd7，OncoMed公司已经开发出了一种靶向Fzd7 CRD结构域的单抗OMP-18R5(vantictumab)，目前正处于晚期非小细胞肺癌(NSCLC)、晚期HER2(人表皮生长因子受体2)阴性乳腺癌以及晚期胰腺癌的Ⅰ期临床试验中(Flanagan DJ et al.,2019,Cancer Res,79:970-81；Gurney A et al.,2012,Proc Natl Acad Sci USA,109:11717-22)。OMP-18R5还与Fzd受体家族中的Fzd1、Fzd2、Fzd5和Fzd8有交叉反应，预示OMP-18R5可能被用于多种癌症的治疗，但是对靶标蛋白特异性的缺失可能会导致脱靶效应而影响抗体的功效。