[发明专利]POCT的PCR结果快速获得方法及装置

说明书

本发明公开了一种POCT的PCR结果快速获得方法，将待检测样品平均分成N份，将各个平分后的样品于相同的条件下同时进行荧光定量PCR扩增，并实时监测各个平分后的样品的荧光值，N为不小于100的自然数，平分后的样品分别位于不同的反应容器内且均被放置于相同的空间内并处于同样的反应条件进行PCR扩增，各个反应容器的高宽比大于1。利用本发明的方法，能够将利用PCR进行POCT的检测时间缩短至15分钟以内，实现分子诊断真正的即时化，本发明采用分液扩增模式、多点背景对比寻找突破阈线、增加光路检测距离三个方面进行PCR扩增设计和检测模式实现快速扩增的目标，具备稳定、快速、准确的特点。

技术领域

本发明属于核酸检测技术领域，具体涉及一种POCT的PCR结果快速获得方 法和装置。

背景技术

即时检验(point-of-care testing，POCT)，指在病人旁边进行的临床检 测及床边检测(bedside testing)，即时检验是在现场采样完毕后立刻进行检 测分析，省去了将标本带回实验室，并在实验室完成复杂的前处理程序的繁冗 的工作过程，其能够在现场快速得到检验结果，POCT可以不必要求由专业的检 验人员操作也能得到样品的检测结果，因而增加了检测的快捷性。

通过PCR(Polymerase ChainReaction)，聚合酶链式反应技术能够对多种 传染病、遗传性疾病及肿瘤等进行早期诊断，在进行POCT的过程中越来越多的 采用PCR技术来完成。PCR的过程是利用样本在两个或三个温区内的反复升降温 过程，实现对于核酸信号的指数级成倍放大，再通过特定的检测手段读取信号 进行分析判读，因而能够确保疾病检测的灵敏度与特异性。

然而，利用PCR技术获得检测结果必须经历多个循环周期才能得到，因此 其必然存在检测的时间较长的问题，通常PCR检测过程大约需要1-2小时，此 外，利用PCR技术对于样本的初始靶核酸序列的浓度要求较高，若初始的靶核 酸序列浓度较低的话，若想得到准确而可靠的检测结果，则需要更多的PCR循 环才能得到，这将会使检测时间更长。因而,将常规的PCR技术应用于POCT过 程也使得检测时间较长，这显然并不能满足POCT的应用需求。

为了提高PCR扩增靶序列的效率，通常的解决办法是提高PCR的控温模块 (Block)的变温速率，缩短单个循环的时间，从而使总的检测时间缩短到1小 时以内。另一个比较有效的思路是增加PCR的温度模块数量，使单一Block时 间上形成的循环变成多个并列模块在空间上的循环以完成PCR扩增，比如通过 在微流控芯片的流道内实现扩增，这种方式能将利用PCR技术检测的时间缩短 到40分钟以内。然而，这离真正意义上的POCT(将检测时间缩短至15分钟) 仍然还有不小的差距。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种用于POCT过程的快速获得PCR结 果的方法，利用本发明的方法能够将检测结果的获得时间控制在15分钟以内。

本发明的目的之一在于，提供一种POCT的PCR结果快速获得方法，将待检测 样品平均分成N份，将各个平分后的样品于相同的条件下同时进行荧光定量PCR 扩增，并实时监测各个平分后的样品的荧光值，所述N为不小于100的自然数。 因而，经过平分后的N个小样本体系中只要有一个具有阳性扩增，在经过有限次 循环后，即可快速判读出阳性判断结果；将样本平分为N份，在每一次循环，都 会提供N个数据点，有效消除系统噪声，因而提高检测灵敏度；经过均分后的样 本体系的体积变小，因而，对各个样本体系的升降温也更加迅速，从而有效缩 短PCR过程的时间。

进一步的，平分后的样品分别位于不同的反应容器内，各个所述反应容器 均被放置于相同的空间内并处于同样的反应条件。