[发明专利]一色齿毛菌来源漆酶及其基因与应用

说明书

本发明提供一种一色齿毛菌来源漆酶及其基因与应用，属于生物技术领域。本发明提供一种来源于一色齿毛菌的LacB漆酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，其基因全长序列如SEQ ID NO.1所示，cDNA序列如SEQ ID NO.2所示。本发明还公开了LacB漆酶的发酵生产方法，由一色齿毛菌发酵生产，发酵培养至第六天产漆酶量可达652 U/mL，具有产量高，产酶周期短的优点。LacB漆酶在环境激素降解中具有显著的作用效果，对己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚、β‑雌二醇、双酚A、氢化泼尼松的降解率在98%以上。LacB漆酶为环境污染物治理提供新途径，具有好的经济效益和社会效益。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一色齿毛菌来源漆酶及其基因与应用。

背景技术

漆酶（Laccase，EC1.10.3.2）是一类含铜多酚氧化酶，属于蓝色多铜氧化酶（bluemulti-copper oxidase）家族，广泛地存在于真菌、植物、昆虫中。其中，担子菌门的白腐真菌作为主要的漆酶生产菌，具备优良的降解纤维素、半纤维素的能力。目前的研究表明，漆酶能够高效且清洁地去除多种传统物理化学方法无法有效清除的持久性有机污染物（包括染料、多种抗生素及含激素类药物、苯酚、芳胺及其衍生物等），这使得漆酶在环境修复领域的应用受到广泛关注。

环境激素污染物是继臭氧层破坏、温室效应之后又一全球性的重大环境问题，其污染控制己受到全球性关注。环境激素是指由于人类的生产、生活而释放到环境中，影响人体和动物体内正常内分泌系统的外源性化学物质，具有致畸性、致突变性、致癌性、生殖毒性以及低浓度长期危害的特征，主要来源于工业废水、生活废水、制药产业及个人护理产品，在自然环境中难以被分解。目前已知的环境激素类物质有70多种，漆酶能降解其中的苯酚、甾体类激素及其衍生物、多环芳香化合物 (PAHs)、 氯化芳香化合物、芳胺及其衍生物等物质，反应具备高效率、条件温和、不易造成二次污染等特点，使其在环境激素处理方面显示出了较大的研究价值和应用潜力。

然而大多数真菌漆酶普遍存在产酶周期长，产酶量低且不稳定的问题，例如Panus tigrinus在优化后的培养基中培养11 d时最高产酶量为2.2 U/mL，Lentinus sp.在培养16d时最高酶产量为58 U/mL，Cerrna unicolor IBB 发酵14 d最高酶活为152 U/mL，本实验室研究的另一株齿毛菌5.1011经培养基优化后在发酵第15天时得到最高酶活为123 U/mL，这限制了菌株的应用价值，是阻碍漆酶工业应用的主要原因之一。因此对具有高产量特点的酶源进行开发，探索漆酶对环境激素污染物的降解效果、催化氧化机制，评估代谢产物的环境效应等必将具有实际意义和良好的经济效益。

发明内容

本发明的目的在于提供一种一色齿毛菌来源漆酶及其基因与应用。本发明源于一色齿毛菌的一种新漆酶在环境激素污染物降解中具有显著作用效果，在环境污染物治理方面有广阔的应用潜力。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一色齿毛菌来源LacB漆酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

一色齿毛菌来源LacB漆酶的基因，所述基因的全长序列如SEQ ID NO.1所示，cDNA序列如SEQ ID NO.1所示。

一色齿毛菌来源LacB漆酶的发酵生产方法：一色齿毛菌在发酵培养基中经液体摇瓶发酵，离心收集发酵液，分离纯化获得漆酶LacB。