[发明专利]一种细胞核DNA染色方法

说明书

本发明公开了一种细胞核DNA染色方法，由以下步骤组成：配制AF固定液、水解液、漂洗液以及伊红染色液；配制细胞DNA染色液；细胞DNA染色液由体积比为1∶1的细胞DNA染色液A和细胞DNA染色液B组成；将病理样本放入AF固定液中固定；流水清洗后，放入水解液中水解；流水清洗后，放入细胞DNA染色液中染色；流水清洗后，放入漂洗液中漂洗；乙醇逐级脱水，放入伊红染色液，无水乙醇脱色，晾干、封片。本发明染色时间大大缩短；水解液由非易制毒化学品组成，属于环境友好型试剂；AF固定液较以往的固定液，不含乙酸，对人体刺激小；细胞DNA染色液配制简单，无需加热煮沸，有效期长于18个月，即用型，适于商业推广。

技术领域

本发明涉及一种染色方法，尤其涉及一种细胞核DNA染色方法。

背景技术

自1954年，Van Duijn发现一种专门用于染小鼠肝肾细胞核的硫堇-亚硫酸盐试剂以来，此项技术已被广泛应用于细胞核DNA含量的测定。Feulgen染色是显示细胞核DNA较具特异性的一种染色法，DNA双链中的特定碱基可被酸性物质水解断开，暴露出游离醛基(RNA无此特性)，游离的醛基与细胞DNA染色液中的蓝紫色中间产物结合形成蓝紫色的细胞核，即DNA在细胞核内的分布位置及准确含量。由于传统方法染色过程繁琐，染色时间长，极易受组织固定液种类、酸解时间和温度的影响，直接影响着细胞DNA含量测定值的准确程度。传统方法使用的盐酸为易制毒化学品，管制严格不易购买，且挥发性强不利于人体健康。传统细胞DNA染色液配制复杂，过程中需要煮沸，有效贮存期约为2-5 天，如此短的保质期妨碍了这种试剂的存储，也妨碍了它的商业应用。

发明内容

为了解决上述技术所存在的不足之处，本发明提供了一种细胞核DNA染色方法。

为了解决以上技术问题，本发明采用的技术方案是：一种细胞核DNA染色方法，由以下步骤组成：

I、配制AF固定液、水解液、漂洗液以及伊红染色液；

II、配制细胞DNA染色液；细胞DNA染色液由体积比为1∶1的细胞DNA染色液 A和细胞DNA染色液B组成；其中，细胞DNA染色液A包括质量份为0.1～1份的硫堇、30～50份的醇、50～70份的酸性过滤水，细胞DNA染色液B包括质量份为 30～50份的醇、1～3份的亚硫酸盐、50～70份的蒸馏水；

III、将病理样本放入AF固定液中固定10～15min；流水清洗后，放入水解液中水解15～30min；流水清洗后，放入细胞DNA染色液中染色20～40min；流水清洗后，放入漂洗液中漂洗5-10min；50％乙醇、75％乙醇、95％乙醇逐级脱水，放入伊红染色液1～3min，无水乙醇脱色，晾干、封片。

进一步地，AF固定液由体积比为1∶9的甲醛溶液和95％乙醇组成。

进一步地，水解液由质量份为50～150份的酸液和20～50份的超纯水组成；其中酸液由固体盐酸、磷酸中的一种或两种组成。

进一步地，固体盐酸由质量分数为50％的水合肼、36％的盐酸和14％的水组成，烘干制得；磷酸为市售商品。

进一步地，漂洗液由质量份为0.5～1份的亚硫酸盐和100份的酸性过滤水组成；其中亚硫酸盐包括质量份为0～1份的亚硫酸氢钠和0～1份的偏重亚硫酸钠。

进一步地，酸性过滤水为25℃条件下pH＜3的水。

进一步地，伊红染色液包括质量份为0.1～1份的曙红Y和100份的95％乙醇。

进一步地，步骤II中醇为乙醇、乙二醇、异丙醇和叔丁醇中的一种或多种按任意比组成。

进一步地，步骤II中亚硫酸盐为偏重亚硫酸钠或亚硫酸氢钠或亚硫酸钠。